Clonación y caracterización de genes codificantes para proteasas de uso industrial a partir de candida caseinolytia, yarrowa y bacillus licheniformis

Resumo

Este trabajo de investigación se ha estructurado en capítulos. Hay una introducción general sobre las proteasas y tres capitulos en los que se hace referencia al estudio de las mismas en los tres microorganismos por separado. Las proteasas son enzimas degradativos que catalizan la ruptura de los enlaces peptídicos de las proteinas. Aparecen en una amplia variedad de fuentes naturales tales como animales, plantas, microorganismos, protozoos y virus. El estudio de las proteasas microbianas está incrementando debido a su importancia en la aplicación industrial y biotecnológica. El objetivo general de este trabajo es la búsquedo de microorganismos productores de proteasas con potencial aplicación industrial. Basándonos en la capacidad de Candida caseinolytica de producir una proteasa de interés biotecnológico nos planteamos su purificación y caracterización, el estudio del crecimiento celular y optimización de su producción en un fermentador industrial y su aplicación en la digestión de restos de pescado. Tras la realización de los experimentos diseñados para tales fines, llegamos a las siguientes conclusiones: Candida caseinolytica produce una enzima con actividad caseinolitica de 35 kDa de peso molecular con una temperatura óptima de 30°C y un amplio rango de pH óptimo. Los resultados del escalado en un fermentador de 20 L de capacidad demostraron que su aplicación industrial es factible. Mediante el análisis por HPLC de las muestras obtenidas tras la digestión de restos proteicos de pescado con el concentrado enzimático se concluye que se trata de una endopeptidasa. Yarrowia lipolytica secreta altos niveles de enzimas extracelulares. La proteasa mejor estudiada es la proteasa alcalina extracelular (AEP) que esta codificada por el gen xpr2. El objetivo principal planteado en este capítulo fue la subclonación y sobreexpresión del gen xpr2 en Pichia pastoris. Asi se llegó a las siguientes conclusion