Definición de marcadores moleculares específicos en especies de langostinos de interés comercial para el sector pesquero y acuícola

Resumo

En el Capítulo 1 se describe la patente desarrollada en el presente estudio y titulada: Método de identificación de diferentes especies de la Superfamilia Penaeoidea mediante análisis de ADN La invención, protegida a nivel internacional, se refiere a un método de identificación de langostinos comerciales pertenecientes a la Superfamilia Penaeoidea, que comprende las principales especies extractivas y de acuicultura. La metodología desarrollada basada en el análisis de restricción de secuencias del ADN mitocondrial permite identificar al menos 23 especies de relevancia comercial en productos frescos y procesados. En el Capítulo 2 se presenta la contribución más amplia al conocimiento del gen 16S rRNA/tRNAVal del ADN mitocondrial en la Familia Penaeidae realizada hasta el momento presente. Se aportan casi 40 secuencias distintas de 15 especies de gran interés comercial para el sector alimentario internacional y que permiten: (i) el desarrollo de un método de PCR-RFLP para la detección e identificación de 19 especies en alimentos frescos y procesados; (ii) un mejor conocimiento de la filogenia en este grupo de especies en función de las poblaciones y sus orígenes. El estudio comprendió más de 50 productos alimentarios comerciales que incluían langostinos como principal componente o como ingrediente. El método utilizado para el control de autenticidad es el descrito en el capítulo anterior, basado en el análisis de un fragmento de 531 pb del gen 16S rRNA/tRNAVal del ADN mitocondrial. En el Capítulo 4 se estudia, por vez primera, el gen citocromo b mitocondrial en diversas especies de la Familia Penaeidae con fines de autenticidad alimentaria. Este gen se halla infra-estudiado en este grupo de especies, a diferencia de lo que sucede en otras especies animales de interés alimentario. Se aborda el estudio de una región del gen citocromo b mitocondrial, que nos permite aportar en torno a 20 secuencias nucleotídicas, aumentando en más de un 100% el número de secuencias de este gen descritas para este grupo de especies. Esta información nos permite: (i) proponer un nuevo método de autentificación de aplicación en seis de las principales especies de langostinos comercializadas a nivel internacional; (ii) proponer el gen citocromo b como un marcador útil en el establecimiento de las relaciones filogenéticas, al nivel de otros marcadores ampliamente utilizados como los genes 16S rRNA o citocromo oxidasa I mitocondriales. En el Capítulo 5 se desarrolla una metodología original de identificación específica de tres de las principales especies de langostinos comerciales a nivel internacional: Penaeus monodon, Litopenaeus vannamei y Fenneropenaeus indicus. El estudio que se presenta nos permite detectar e identificar, tanto en productos frescos como procesados, las tres especies citadas anteriormente, permitiendo su diferenciación con respecto a otras especies de menor valor comercial y que pueden complicar el etiquetado de estos productos. Los oligonucleótidos específicos desarrollados, denominados MPNF/MPNR, PNVF/PNVR y PNIF/PNIR, para la identificación de P. monodon, L. vannamei y Fen. indicus, respectivamente, permiten amplificar fragmentos específicos en el rango de 151-362 pb, lo que hace que esta metodología sea especialmente útil para productos tanto frescos como procesados, donde el ADN haya podido sufrir fragmentación debido a las condiciones intensas del procesado industrial de los productos. En el Capítulo 6 se estudian las relaciones filogenéticas de langostinos peneidos utilizando tres marcadores moleculares, 16S rRNA/tRNAVal, 16S rRNA y citocromo oxidasa I (COI). De los marcadores moleculares estudiados, se ha visto que el 16S rRNA/tRNAVal es más adecuado para su utilización en la identificación de especies debido a que existe una mayor variabilidad inter e intraespecifica, lo cual facilita el diseño de un método PCR-RFLP para la identificación rápida de especies de interés comercial.