Desarrollo y validación de métodos de alta sensibilidad para la caracterización y determinación de las quinolonas reguladas por la unión europea en alimentos de origen animal

Resumo

Las quinolonas son una clase de antibióticos de acción bactericida de origen sintético. Son ampliamente utilizadas tanto en medicina humana como en veterinaria. El empleo de estos antibióticos en animales productores de alimentos tiene fines fundamentalmente terapéuticos en tratamientos infecciosos, como promotores de crecimiento y su uso como profilácticos. Sin embargo, la administración no adecuada de estos antibióticos puede representar un riesgo para la salud humana cuando residuos de quinolonas permanecen en el tejido animal y pasa a la cadena de alimentación humana. Con el fin de salvaguardar la salud pública, la Unión Europea ha establecido unos límites máximos de residuos (MRLs) para fármacos veterinarios en tejidos animales destinados al consumo humano (CE/2377/90). En esta tesis doctoral se han desarrollado diferentes métodos de análisis para la determinación de quinolonas en alimentos de origen animal, satisfaciendo en todo momento las normativas relativas al control de estos fármacos. Las matrices biológicas estudiadas en esta tesis han sido músculo de cerdo y pavo, plasma de cerdo y vaca, hígado de cerdo y leche de vaca. Por un lado se han establecido diferentes métodos de tratamiento de muestra en tejidos biológicos utilizando técnicas de extracción de antibióticos como la extracción sólido-líquido, extracción líquido-líquido, extracción con microondas, utilizando sistemas de extracción en fase sólida como técnica que permite preconcentrar y limpiar los extractos resultantes. Se han utilizado herramientas matemáticas basadas en los diseños de experimentos para la optimización de esta tediosa etapa, obteniendo valores óptimos de las diferentes variables implicadas. Como técnicas de determinación de los antibióticos se han empleado la cromatografía de líquidos acoplada a la espectrometría de masas con un cuadrupolo de baja resolución (LC-MS), masas en tándem (LC-MS/MS) y con un analizador de tiempo de vuelo (LC-ToF-MS). La metodología desarrollada ha sido validada de acuerdo con la normativa comunitaria CE/657/2002 y la guía de la Food and Drug Administration (FDA). Los métodos desarrollados se han aplicado a la determinación de quinolonas en muestras positivas procedentes de animales oralmente medicados, así como muestras procedentes de diferentes mercados para comprobar si las quinolonas estudiadas están presentes en estas muestras y su nivel de concentración.