Aplicación de la técnica de análisis de secuencias repetitivas en tándem (mlva) en la subtipificación y seguimiento epidemiológico de aislados de cepas verotoxigénicas y enterohemorrágicas de escherichia coli de origen humano y animal

Resumo

Los Escherichia coli verotoxigénicos (ECVT) son importantes patógenos para los seres humanos, responsables de procesos patológicos graves como la colitis hemorrágica o el síndrome urémico hemolítico. La electroforesis en campo pulsante (PFGE) es la técnica de referencia para la subtipificación de esta bacteria y de otros enteropatógenos. No obstante, presenta algunas limitaciones como son: su laboriosidad, incapacidad para caracterizar algunas cepas, el coste de los equipamientos y su interpretación, por lo que se sigue investigando para encontrar métodos alternativos de tipado. La técnica de análisis de secuencias repetitivas en tándem (MLVA) basada en la amplificación de secuencias repetitivas en tándem mediante PCR, ha sido empleada igualmente con éxito para el estudio de aislados ECVT. Sin embargo, se necesitan estudios con un mayor número de aislados y diferentes situaciones epidemiológicas que permitan demostrar su aplicabilidad. Para abordar estas necesidades, se estudió la aplicabilidad de la técnica de MLVA empleando dos protocolos para la subtipificación de 181 aislados de E. coli O157:H7 y ECVT no-O157 de los serogrupos O5, O91 y O146, obtenidos a partir de distintos orígenes con y sin información epidemiológica conocida. Ambos protocolos de la técnica de MLVA demostraron su aplicabilidad para la subtipificación de aislados de E. coli O157:H7. Además, el protocolo de la técnica de MLVA descrito por Noller et al. (2003), empleado en combinación con la técnica de PFGE, aumentó su poder de discriminación, mejorando la capacidad del PFGE para diferenciar entre aislados con y sin relación epidemiológica. Sin embargo, el protocolo de la técnica de MLVA descrito por Lindstedt et al. (2007) empleado para la subtipificación de aislados ECVT no-O157 de los serogrupos O5, O91 y O146 no permitió una discriminación apropiada para su aplicación sistemática, siendo incapaz de clasificar clones de ECVT identificados mediante la técnica de PFGE presentes en individuos de una misma explotación. No obstante, la técnica ha permitido el seguimiento de aislados secuenciales temporales de los serogrupos O5, O91 y O146 procedentes de un mismo individuo. Se necesitan nuevos protocolos de la técnica de MLVA con secuencias repetitivas que aumenten el poder de discriminación de la misma para el análisis de aislados ECVT no-O157. Éstos podrían diseñarse gracias a la generalización de nuevas técnicas como la WGS, ya que se dispone de una mayor cantidad de genomas completos de ECVT no-O157.