El cultivo primario de celulas cromafines como modelo para estudios de neurotoxicidad inducida por organofosforados

Resumo

La "neuropatía retardada inducida por compuestos organofosforados" (OPIDN) es un síndrome neurodegenerativo que se inicia con la inhibición y modificación específica ("aging") de la esterasa diana de neuropatía (NTE). El cerebro de gallina es una fuente muy importante de NTE y por ello es este tejido el modelo más habitual para el estudio de la enzima. Sin embargo, estudios previos realizados en nuestro laboratorio han demostrado que la médula adrenal bovina posee los niveles de NTE más altos descritos hasta la fecha. En el presente trabajo se ha realizado una caracterización de la NTE y de otras esterasas relacionadas en homogenizado y fracciones soluble y particulada de médula adrenal de varias especies animales (bovina, porcina, caprina, equina y ovina). La actividad fenilvalerato esterasa (PV esterasa) total y también la NTE fue mayor en fracción particulada (P) que en fracción soluble (S) en todas las especies. La especie que mostró mayor actividad NTE en P fue la especie bovina (4260±720 mU/g tejido) seguida de porcina, ovina, caprina y equina. El porcentaje de NTE frente a la actividad PV esterasa total fue mayor en la especie bovina (70%) seguida de la porcina (57%) Una vez elegida la especie bovina como modelo más apropiado, se procedió a la caracterización de las actividades PV esterasas en células cromafines bovinas. La actividad PV esterasa total y NTE encontrada en este sistema fue de 22±3 y 12±2 mU/106 células respectivamente, con lo cual la NTE representó un 55% de la actividad total. Las células cromafines mostraron una cinética de inhibición por paraoxon y mipafox muy similar a la que mostró el homogenizado de médula adrenal bovina. Se ha demostrado, que la actividad NTE inhibida por OPs neuropáticos como el mipafox o el HDCP se recupera total o parcialmente a las 120 horas de la inhibición durante 60 min. También se ha llevado a cabo la construcción de un adenovirus que contiene el gen de la