Purificación y caracterización de glutatión s-transferasas de trucha arco iris, estudio experimental para su aplicación como biomarcadores potenciales de contaminación ambiental

Resumo

Las enzimas de biotransformación constituyen uno de los mecanismos de defensa del organismo, destinadas a favorecer la metabolización de los xenobióticos, transformándolos en compuestos más hidrosolubles, y por tanto, más fácilmente excretables al medio. Dentro de estas enzimas, nos encontramos las Glutatión S-Transferasas (GST), formas diméricas ampliamente distribuidas en la naturaleza, y que catalizan la conjugación del tripéptido Glutation con una gran variedad de xenobióticos que poseen centros electrofilicos en su estructura. Cada dia es mayor el interés por realizar una completa purificación y caracterización de estas formas enzimáticas en diversas especies de peces, por el importante papel que podrían desempeñar como posibles biomarcadores de contaminación medioambiental. Por tanto, los objetivos del presente trabajo serán fundamentalmente tres: - Purificar y caracterizar adecuadamente las formas citosólicas de GST existentes en cuatro órganos de trucha arco iris: higado, riñón, branquias y epitelio olfatorio. - Purificar y caracterizar las formas citosólicas de GST existentes en hepatocitos aislados en fresco procedentes de esa misma especie animal, como paso fundamental para lograr validar el empleo de los métodos in vitro en estudios de ecotoxicología. - Estudiar la existencia de un fenómeno de inducción enzimática provocado por una mezcla comercial de unos importantes xenobióticos medioambientales como son los Bifenilos Policlorados, PCBs. Los resultados obtenidos permitieron determinar la existencia de 5 subunidades diferentes de las enzimas GST citosólicas, presentes en los cuatro órganos estudiados, pero variando el nivel de expresión en cada uno de ellos. La identificación de la secuencia aminoacídica de la fracción aminoterminal de dos de estas subunidades, unido a los valores correspondientes a la masa molecular, permitió establecer que se trataba de formas pert