Cd50 (icam-3)una nueva molecula de adhesion leucocitaria. Clonacion genica y analisis funcional

Resumo

EL, CD50 ES UN ANTIGENO DE DIFERENCIACION GLICOPROTEICO DE 110-120 KD Y CON UNA EXPRESION HEMATOPOYETICA CASI EXCLUSIVA. DEFINIDO POR LA PECULIAR REACTIVIDAD DE TRES ANTICUERPOS MONOCLONALES, TODOS ELLOS PRODUCIDOS EN NUESTRO LABORATORIO, EL PRESENTE TRABAJO HA DEFINIDO ESTA MOLECULA FUNCIONAL Y ESTRUCTURALMENTE. ASI A PARTIR DE LAS SECUENCIAS PEPTIDICAS PARCIALES DEL CD50 DIGERIDO CON CNBR, CLONAMOS EL CDNA DE ESTA MOLECULA, USANDO UN PRODUCTO DE PCR COMO SONDA EN EL CRIBAJE DE UNA GENOTECA DE LINFOCITOS EN FAGO LAMBDA GT10. LA SECUENCIA DE LA CLONA MOSTRO QUE EL CD50 ERA UN NUEVO MIEMBRO DE LA SUPERFAMILIA DE LAS IMMUNOGLOBULINAS, MUY SIMILAR A LAS MOLECULAS DE ADHESION ICAM-1 E ICAM-2. POSTERIORES ESTUDIOS COMPARATIVOS BIOQUIMICOS Y FUNCIONALES, RECONFIRMARON QUE EL CD50 COINCIDIA CON OTRA MOLECULA, EL ICAM-3, EL TERCER LIGANDO DEL LEA-1. EN ESTA TESIS, PRESENTAMOS TAMBIEN LOS ESTUDIOS QUE DEMUESTRAN LA CAPACIDAD CO-ESTIMULATORIA DEL CD5O: AUGMENTO DE LA FUNCION INTEGRINA BETA1 Y BETA2, CON INDUCCION DE LA ADHESION DE LOS LINFOCITOS T A ENDOTELIO ACTIVADO Y A MATRIZ EXTRACELULAR, INDUCCION DE LA AGREGACION HOMOTIPICA, INDUCCION DE LA EXPRESION EN MEMBRANA DE CD25 Y PRODUCCION DE IL-2 EN CELULAS JURKAT, UNA LINEA T LIMFOBLASTICA,... EL ANALISIS BIOQUIMICO DE ESTA CAPACIDAD DEMOSTRO QUE LA SEÑALIZACION DEL CD50 SE VEHICULA A TRAVES DE LA MOVILIZACION DE CALCIO INTRACELULAR Y LA FOSFORILACION DE TIROSIN-QUINASAS, HABIENDOSE DEMOSTRADO LA ASOCIACION DE ICK Y FYN A CD50. ASI PUES ESTAS DOS TIROSIN-QUINASAS PUEDEN ESTAR EN LA RAIZ DE LA SEÑALIZACION DEL CD50, LA PRIMERA MOLECULA ICAM TRANSDUCTORA DE SEÑALES. POR ULTIMO, HEMOS ANALIZADO EL GEN DEL CD50 POR SOUTHERN BLOT, DETECTANDO UN DOBLE BIALELISMO DEL GEN CON PSTI Y BAMHI. TODOS ESTOS DATOS PERMITEN UNA MEJOR DEFINICION DE LA FUNCION Y ESTRUCTURAR DEL CD50, UNA IMPORTANTE MOLECULA DE ADHESION LINFOCITARIA.