Caracterizacion molecular de 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa, glucoquinasa y subunidad catalitica de la glucosa-6-fosfatasa de higado de dorada(sparus aurata), regulacion nutricional de la expresion de glucoquinasa y glucosa-6-fosfatasa

Resumo

Los peces carnívoros se muestran intolerantes a la glucosa, metabolizan los carbohidratos de forma más lenta y menos eficiente que los mamiferos y presentan un metabolismo encaminado a aprovechar las proteínas, abundantes en su dieta natural. La ausencia de glucoquinasa en hígado de peces carnívoros ha sido considerada una de las posibles causas de la intolerancia a la glucosa observada en estos organismos. En esta tesis, se describe la caracterización molecular de la glucoquinasa de hígado de gilthead sea bream(Sparus aurata), una especie de pez carnívoro conocido como dorada. El cDNA clonado incluye 2056 pares de bases y da lugar in vitro a la sintesis de una proteina de 54 kDa, con actividad glucoquinasa. La afinidad de la enzima presente en extractos crudos de higado de dorada en relación a la glucosa es 3 veces menor a la observada en la glucoquinasa hepática de rata. La actividad glucoquinasa detectada en hígado de dorada es inferior a la descrita en ratas alimentadas. La expresión génica de esta enzima en higado de dorada disminuye después de un ayuno prolongado e incrementa en condiciones de realimentación. Las dietas ricas en carbohidratos, así en carbohidratos, así como el aporte de cantidades crecientes de dieta incrementan también la expresión de la glucoquinasa, que muestra valores máximos de mensajeros y actividad 4-8 horas después de la ingesta de alimento. Adicionlamente, en este trabajo se describe la caracterización molecular de otras dos enzimas implicadas también en el metabolismo del os carbohidratos, la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa y la subunidad catalítica de la glucosa-6-fosfatasa de hígado de drada. El cDNA de la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa,enzima que intetiza y degrada fru-2,6P2, incluye 2527 pares de bases y da lugar in vitro a la síntesis de una proteina de 54 kDa, con actividad 6-PF-2K. El cDNA correspondiente a la glucosa-6-fosfatasa present