Desarrollo de estrategias de transferencia génica ex vivo al sistema nervioso central utilizando celulas troncales neurales de origen murino y humano

Resumo

La tesis ha ido dirigida a la generación de líneas estables de células troncales neurales que sobre-expresan factores neurotróficos (BDNF) y la enzima limitante en la síntesis de dopamina, tirosina hidroxilasa (TH). Se han conseguido obtener líneas estables murinas y humanas que secretan BDNF biológicamente activo. - Los niveles de BDNF endógenos influyen positivamente en la supervivencia de las línea murinas de células troncales neurales HiB5 y C17.2. Sin embargo, niveles altos de BDNF sobre-expresado en estas células tiene un efecto anti-diferenciador, siendo la línea que sobre-expresa una versión anti-sentido de BDNF la que favorece la diferenciación de las células C17.2 hacia un fenotipo más neuronal. - Trasplantes de la línea murina HiB5-AG7 sobre-productora de BDNF en el cerebro adulto de la rata, tienen unos efectos hipertróficos sobre las neuronas colinérgicas del estriado y del núcleo basal magnocelular, a los tiempos estudiados: 1 semana y 3 meses. - La línea de células troncales neurales humana HNSC.100 ha sido caractizada in vivo, no observándose ninguna formación de tumores al se trasplantada en el estriado y sustancia negra de la rata. Las células humanas se integran perfectamente en la citoarquitectura del cerebro intacto de la rata adulta, migrando grandes distancias y cesando de proliferar al cabo de 3 meses. - Se ha conseguido obtener un clon sobre-productor de BDNF a partir de la línea humana HNSC. 100 y clones que sobre-expresan TH. La sobre-expresión de TH en estas células es tóxica, disminuyendo la toxicidad cuando se co-expresa la enzima TH con proteínas neurotróficas como BDNF y GDNG, enzimas detoxificantes, como la SOD1 cit.y proteínas anti-apoptóticas como Bcl-Xl.