Congelación no programada de células progenitoras hematopoyéticas mediante inmersión en baño de metanol

Resumo

Los conocimientos actuales sobre criobiología relacionan la velocidad o tasa de enfriamiento de la solución celular (cph) durante la congelación con los mecanismos de lesión celular. Es necesario mantener una velocidad de congelación constante (1-2 grados c). Por este motivo se utilizan congeladores programables de nitrógeno líquido que aseguran una velocidad de enfriamiento constante. Según nuestra hipótesis de trabajo, la inmersión de la solución de cph a congelar en un baño de metanol e introducidas directamente en un congelador mecánico a -80 grados c lograría velocidades de enfriamientos constantes (1-1,5 grados c/min) independientemente del volumen de las cph. La utilización de dmso al 10% como único crioprotector es satisfactoria. La resolución de esta hipótesis se realiza en dos fases, una primera experimental donde se determina la velocidad de enfriamiento de las cph, y una segunda fase clínica con la realización de trasplantes autologos. La representación grafica de las velocidades de enfriamiento de los diferentes volúmenes de cph introducidos directamente en un congelador mecánico a -80 grados c (sin metanol) muestra una dispersión de dichas velocidades de enfriamiento. La inmersión en metanol de las cph muestra un efecto homogeneizador en la velocidad de enfriamiento (1-1,5 grados c/min). La inmersión en baño de metanol de la solución de cph homogeneiza la velocidad de enfriamiento entre los diferentes volúmenes a congelar. La utilización de plasma autologo y dmso es satisfactoria. Los resultados clínicos referidos a morbimortalidad peritransplante son similares a las referidas en series de enfermos trasplantados con cph congeladas mediante congelación programada. La congelación no programada mediante inmersión en baño de metanol utilizando plasma autologo y dmso es una técnica sencilla, que no ocupa más de 30 minutos, y aplicable de forma satisfactoria en trasplantes autologos de cph de sangre periférica.