Análisis molecular de los mecanismos de regulación de la transcripción por retinoides

Resumo

Los retinoides juegan papeles importantes durante la diferenciacion celular y el desarrollo. Actuan regulando la transcripcion de genes cuyo promotor posee sitios de union para sus receptores. Hemos establecido un sistema de transcripcion in vitro que reproduce la activacion mediada por el acido retinoico (ra) sobre el promotor del gen de la isoforma b2 del receptor del ra (rarb2), que responde naturalmente al ra in vivo. La adicion del receptor heterodimerico rxra/rara estimula la transcripcion del gen rarb2, obteniendose el maximo nivel de activacion en presencia del ra. Estos resultados demuestran, por primera vez, que el heterodimero rxra/rara es directamente responsable de la activacion transcripcional mediada por el ra. Mediante el uso de agonistas y antagonistas especificos de los receptores rara y rxra, asi como mediante la utilizacion de mutantes de delecion de sus regiones carboxiterminales, podemosconcluir que el dominio de activacion dependiente del ligando (af-2) del rara es indispensable para la estimulacion trancripcional mediada por el heterodimero rxra/rara, mientras que el del rxra es dispensable. Se ha encontrado que la union de los distintos ligandos (agonistas y antagonistas) produce cambios conformacionales en los dominios de union al ligando (lbd) de los rxrs y los rars. Dicho cambio podria ser el responsable del cambio en actividad transcripcional inducido por los retinoides. Utilizando un sistema reconstituido en el que los factores de transcripcion basales (gtfs) han sido extensamente purificados, pudimos concluir que la activacion dependiente de retinoides requiere, ademas de los gtfs y el heterodimero rxra/6h-rara, factores "mediadores" adicionales. Algunos de estos factores pueden encontrarse en una fraccion cromatografica (usa) en la que se ha descrito previamente la existencia de mediadores positivos y negativos de la transcripcion.