Caracterizacion y expresion del gen que codifica para la proteina factor 5 del inicio de la traduccion en eucariotas (eif-5) en zea mays-

Zusammenfassung

Se ha aislado y secuenciado el cDNA y la región genómica del gen que codifica para la proteina factor 5 del inicio de la traducción en eucariotas (eIF-5)en Zea mays. Las 1975 pares de bases del cDNA codifican una proteina de 451 aminoacidos cuya secuencia contiene un dominio dedo de Zinc. Por analisis de hibridación de filtros a los que se les habia transferido DNA se ha comprobado la existencia de una copia única de este gen en el genoma de maiz y por analisis de RFLP se ha mapeado un unico locus en el brazo largo del cromosoma 4 de maiz. Se han secuenciado 7 kilo bases de la región genómica, del analisis y caracterización de estate deduce la existencia de numerosos elementos repetitivos en las regiones intergenicas y de un largo intrón de 1300 pares de bases en la region 5¿no codificante. Aunque se trata de un gen constitutivo, de los estudios de expresión realizados por hibridacion de filtros a los que se les habia tranferido RNA poli A+ y de hibridación in situ sobre tejidos, se deduce que la acumulación de RNA mensajero de este gen está ligada a procesos de division celular, detectandose la mayor expresión en regiones meristemáticas. De los estudios de similitud realizados con otras proteinas eIF-5 de otros organismos se constata lo extremadamente conservada que se encuentra la region N-terminal de la proteina. En esta region se encuentra el dominio dedo de Zn. Del conocimiento de la función de la proteina eIF-5 en la etapa 5ª de la fase de iniciación de la sintesis de proteinas se deducia su posible interacción con la subunidad ribosomica 40S. Se obtuvo proteina de maiz por transcripción y traducción in vitro y se realizaron estudios de unión de la proteina a polimeros de DNA de cadena sencilla y de poli U los cuales demostraron la dependencia del ion Zn para la unión de la proteina. Se propone que el dominio dedo de Zn y las regiones conservadas del extremo N-terminalson las responsables de la interacción de