Estudio de la lisogenia doble de fagos-stx2

Resumo

Los fagos-STX2 infectan E.Coli confiriéndoles la capacidad de expresar la toxina Shiga (STX), haciendo que estas cepas se vuelvan patogénicas. Las cepas de E. Coli productoras de Toxina Shiga se llaman Stec. Se ha observado una alta incidencia de cepas setec aisladas del medio ambiente o de muestras clínicas que son portadoras de más de un fago-stx. Por ello el principal objetivo de la tesis fue el estudio de la doble lisogenia doble en condiciones de laboratorio para poder entender el porqué de esta incidencia. Para ello se caracterizaron los fagos-stx aislados de diferentes cepas Stec. Se realizaron estudios de lisogenia simple de estos fagos en cepas de E.Coli de laboratorio. Se obtuvieron fagos recombinantes que incorporaron un gen de resistencia a antibiótico en medio del operón de la toxina Shiga para marcarlos, de manera que se pudiera diferenciar entre el primer profago-stx y el segundo. Se realizaron los ensayos de lisogenia doble en los que se observó que la lisogenia doble ocurre más frecuentemente que la simple en condiciones de laboratorio, lo que explica esta alta incidencia de cepas Stec portadoras de más de un fago-stx. Posteriormente se analizó el efecto de la doble lisogenia en la expresión y síntesis de la toxina shiga y en la liberación de los fagos-stx. Se observó que la doble lisogenia mantiene el estado lisogénico por una menor producción de fagos y de toxina. Posteriormente se analizaron los loci de inserción ocupados por los fagos-stx del estudio en diferentes huéspedes. Los estudios confirman que el locus de inserción utilizado depende de la disponibilidad del mismo en la cepa en cuestión. Los fagos-stx se insertan preferentemente en una diana, pero si no está disponible las recombinasas fágicas han evolucionado para reconocer otros lugares de inserción.