Analisis funcional y estructural del complejo ksr1/14-3-3

Zusammenfassung

título de la tesis: ANÁLISIS FUNCIONAL Y ESTRUCTURAL DEL COMPLEJO KSR1/14-3-3. resumen: La cascada de señalización de las ERKs constituye una de las vías de transducción de señales mejor estudiada. Está implicada en numerosos procesos clave, tales como la proliferación, la diferenciación, la apoptosis, la migración, y la tumorogénesis. La proteína Kinase Suppressor of Ras 1 (KSR1) es esencial en el control de esta vía de señalización, al funcionar como un scaffold molecular sobre el que se ensamblan los distintos componentes individuales del signalosoma RAF/MEK/ERK. La función scaffold de KSR1 está regulada principalmente por las proteínas 14-3-3. Éstas constituyen una gran familia de proteínas altamente conservadas que se expresan ubicuamente en las células eucariotas. En mamíferos se han descrito siete isoformas, codificadas por genes distintos y denominadas p\ y, e, tj, o, t y Estas proteínas forman dímeros capaces de unir motivos consenso que contienen residuos serina y/o treonina fosforilados. En concreto, KSR1 interacciona con 14-3-3 a través de los residuos S297 y S392, mediante un mecanismo regulado por la GTPasa Ras. Existen pocos trabajos que hayan investigado las funciones específicas de las isoformas 14-3-3 y, en particular, se desconocía si KSR1 interacciona de manera promiscua con todas las isoformas 14-3-3 o, por el contrario, la asociación ocurre de manera selectiva, con determinadas isoformas. Utilizando diferentes aproximaciones experimentales, hemos demostrado en esta Memoria que, in vivo, KSR1 interacciona específicamente con las isoformas 14-3-3y y 14-3-3t). Esta interacción es funcionalmente relevante ya que regula la localización subcelular de KSR1 y su función scaffold para ERK. Además, hemos demostrado que el segmento variable carboxi-terminal de 14-3-3 confiere especificidad a la interacción con KSR1 y que la fracción de 14-3-3y unida a KSR1 forma homodímeros y heterodímeros únicamente con las isoformas 14-3-3t y 14-3-3^. En resumen, nuestros datos indican que, a pesar de compartir los mismos motivos consenso de unión, existen determinantes moleculares, tanto en las isoformas 14-3-3 como en los ligandos, que permiten interacciones específicas con éstos.