Implicación de la Endotelin Convertasa 1 en la vía secretoria de procesamiento y presentación de antígenos por MHC de clase I mediada por furina

Zusammenfassung

Una vía alternativa secretoria de procesamiento y presentación de antígenos a linfocitos T CD8+ (CTL) por moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I mediada por furina se definió en nuestro laboratorio. La proteína secretoria HBe de la cápsida del virus de la hepatitis B puede proporcionar eficientemente péptidos antigénicos localizados en su extremo carboxilo para la carga endógena de moléculas de MHC de clase I en ausencia de TAP. Los péptidos precursores liberados por furina de las quimeras de HBe tienen 29-50 aminoácidos. Un recorte de los péptidos precursores es necesario para producir el tamaño final de los ligandos naturales de MHC de clase I reconocidos por CTL. Los objetivos de este trabajo fueron determinar la forma de actuación de furina sobre la maduración de las proteínas, establecer la importancia para la presentación antigénica de los sitios de corte por furina que son esenciales para la maduración de HBe, estudiar el efecto de la modificación de las secuencias flanqueantes al epítopo, e identificar las peptidasas involucradas en el recorte de los péptidos liberados por furina, todo en la vía secretoria de procesamiento y presentación de antígenos independiente de TAP. La presentación antigénica en células deficientes en TAP, infectadas con virus vaccinia recombinantes (rVV) que expresan proteínas quiméricas de HBe con epítopos situados en su extremo carboxilo en presencia de diferentes inhibidores de proteasas, se estudió mediante ensayos de liberación de 51Cr empleando CTL específicos del epítopo y de moléculas H-2Ld. La expresión y maduración de proteínas se analizó mediante inmunodetecciones. Los resultados obtenidos fueron: furina produce la maduración de las proteínas quiméricas cortando directamente a las mismas, el sitio de corte por furina 151RRGR154 no fue suficiente para la presentación antigénica de las proteínas quiméricas, el