Adaptación de un sistema de propagación de priones in vitro para el cribado masivo de compuestos específicos frente a las encefalopatías espongiformes transmisibles humanas

Zusammenfassung

Las Encefalopatías Espongiformes Transmisibles (EET) son un conjunto de desórdenes neurodegenerativos mortales que afectan a varios mamíferos incluidos los humanos, cuyo agente causante es una isoforma anormalmente plegada (PrPSc) de la proteína del prion celular (PrPC) que adquiere propiedades neurotóxicas y la capacidad de inducir su conformación a otras proteínas del prion. Ninguna de las estrategias terapéuticas desarrolladas durante las últimas décadas ha sido efectiva frente a las EET humanas. La escasez de modelos in vitro e in vivo adecuados para el estudio de las EET humanas hacen que el cribado masivo de compuestos inhibidores de la propagación priónica sea una de las estrategias más exploradas en la actualidad. La mayoría de las moléculas con potencial terapéutico estudiadas en modelos no específicos frente a las EET humanas han revelado un problema de especificidad de especie e incluso de cepa priónica. En esta tesis doctoral, basándonos en la metodología de propagación de priones in vitro PMSA, y tras la modificación de los parámetros fundamentales, se han obtenido distintas PrP recombinantes humanas malplegadas espontáneamente con características depriones bona fide, cuya adaptación a un sistema de cribado masivo ha permitido evaluar la capacidad anti-priónica de un grupo de 18 tetrapirroles. A su vez se ha explorado la capacidad de adsorción de las PrP recombinantes humanas malplegadas a partículas esféricas, lo que ha permitido desarrollar una novedosa metodología de propagación sencilla, rápida y reproducible apta para el cribado masivo de compuestos. Así, los nuevos sistemas de cribado masivo de compuestos anti-priónicos han quedado validados para la búsqueda de compuestos terapéuticos específicos frente a las EET humanas.