Aislamiento, Caracterización y Secuenciación del Gen exoB de Rhizobium leguminosarum bv. Trifolii RS800Su implicación en la Simbiosis

Resumo

Rhizobium leguminosarum bv. Trifolii rs800 posee Capacidad para establecer una relacion simbiotica con Plantas de trebol. Como consecuencia de esta relacion, se Forman en las raices de estas plantas, unas estructuras Denominadas nodulos, donde tiene lugar la fijacion Simbiotica del nitrogeno. Existe una correlacion entre la Produccion de polisacaridos superficiales de la bacteria Y la efectividad del proceso de infeccion. Mediante estudios de hibridacion y complementacion Heterologa hemos demostrado que en rhizobium Leguminosarum bv. Trifolii rs800, existen regiones de adn Equivalentes y funcionalmente intercambiables con genes De rhizobium meliloti implicados en la sintesis del Exopolisacarido (eps), mostrando estas regiones una Organizacion y localizacion genomica diferente a la Existente en r. Meliloti. Por complementacion heterologa De una mutacion en el gen exob de r. Meliloti hemos Identificado, clonado y secuenciado un fragmento de adn Cromosomico de rs800, que contiene una fase abierta de Lectura que muestra un 80% de identidad con la secuencia Aminoacidica de la enzima udp-glucosa 4'epimerasa, Proteina codificada por el gen exob de r. Meliloti. El Analisis del eps y lipopolisacarido (lps) de la cepa Silvestre rs800 y de la cepa rs12, mutante exob de Rhizobium leguminosarum bv. Trifolii que hemos creado por Mutagenesis dirigida, han puesto de manifiesto que esta Mutacion afecta a la sintesis de ambos polimeros. El Analisis por espectroscopia 1h-rmn y glc/ms indica que el Eps que sintetiza la cepa silvestre rs800, es similar al Eps tipo 2 sintetizado por otras cepas silvestres de Rhizobium leguminosarum bv. Trifolii. El eps sintetizado Por el mutante exob carece del residuo de galactosa y de Los sustituyentes unidos a el.