Synthesis of sonic hedgehog protein and development of peptide binders using phage display libraries

Abstract

En la presente tesis se ha desarrollado una metodología basada en el linker N-acylurea (MeDbz), que consiste en la acilación de la amina con un cloroformato para obtener los péptidos con este linker en C-terminal. En solución, el linker contenido en estos péptidos se activa aumentando ligeramente el pH a 7.5. Esto provoca la ciclación del linker y la posterior tioesterificación para obtener finalmente los correspondientes tioestéres peptídicos. Esta metodología puede ser usada para la síntesis de proteínas mediante ligaciones cinéticas controladas y también Ligación Química nativa. Con la finalidad de confirmar la utilidad de esta nueva metodología en la síntesis de proteínas, en esta tesis hemos sintetizado dos análogos de la proteína Sonic Hedgehog. Recientemente se ha relacionado esta proteína con diferentes tipos de cáncer, lo cual la convierte además en una posible diana terapéutica. Esta proteína está constituida por 178 amino ácidos y contiene además dos residuos lipídicos en el extremo C y N terminal. Una vez la proteína fue sintetizada, se decidió usar phage display con la finalidad de obtener ligandos que pudieran servir como posibles inhibidores. Así pues, mediante phage display en proteína p8 se probaron ocho librerías peptídicas de entre 20 y 60 amino ácidos contra los análogos sintetizados. Estos ensayos resultaron con la obtención de ocho clones que presentaban una afinidad de rango nanomolar frente a Sonic Hedgehog.