Identificación de un método de diagnóstico rapido y especifico del gen regulador tax del virus htlv-1 en la leucemia/linfoma de células t y en otras infecciones

Resumo

INTRODUCCIÓN El virus de la leucemia humana de células T (HTVL-1, del ingles Human T-cell lymphotropic virus) ha sido ampliamente estudiado por casi dos décadas debido a su asociación con neoplasia y con la neuropatología, además de, por su capacidad para transformar células T primarias en cultivos celulares. En la actualidad el diagnóstico de este virus es fundamentalmente serológico pero la presencia de anti-HTLV-1 a veces es tardía y no indicativa claramente de enfermedad, por lo que se hacen necesarios ensayos confirmatorios, hasta el momento los estudios de cualificación de la carga viral en la detección de retrovirus mediante estas técnicas moleculares se han reducido a trabajos en un solo centro o a la centralización de las pruebas en un gran laboratorio de referencia. OBJETIVO El objetivo fundamental de este trabajo consiste en la puesta a punto y desarrollo de técnicas de PCR en tiempo real, y su aplicación en el diagnóstico clínico de la infección por HTLV-1 valorando la capacidad de las técnicas de biología molecular para reemplazar con fiabilidad o aumentar la capacidad de detección. MATERIAL Y MÉTODOS Se realizo un estudio prospectivo de casos y controles para detectar la presencia del virus linfotrópico tipo 1 en células mononucleares de sangre periférica, mediante técnicas de PCR convencional y PCR en tiempo real utilizando una región estable del gen estable del gen regulador tax, y para la confirmación de nuestros resultados se diseñaron dos sondas de hibridación de la secuencia diana del gen tax por PCR en tiempo real. Utilizamos como control interno el gen HLA-DQ alfa y como control positivo a las células MT-2 que tienen integrado en un genoma una copia de virus/célula. Se analizaron 580 muestras de las cuales 60 fueron de sujetos con diagnostico de leucemia/linfoma, 320 muestras de sujetos infectados por el VIH, y 200 muestras obtenidas del Centro Vasco de Transfusiones y Tejidos Humanos,