Mutantes de la pared celular obtenido por transposición en yarrowia lipolytica

Abstract

Diversas técnicas han sido desarrolladas para obtener mutantes relacionados con la biogénesis de la pared celular, pero ninguna ha demostrado ser eficaz en estudios que impliquen genes a gran escala. En este trabajo se utilizó una colección de mutantes de Y. Liplytica obtenidas por transposición. Un total de 3656 cepas mutagenizadas por transposición se analizaron determinando su sensibilidad o resistencia a calcofluor white. En el estudio se aislaron un total de 190 mutantes sensibles y 1125 resistentes. El análisis de las secuencias en las bases de datos reveló que sólo un 10% de los genes presentaban homología significativa con genes conocidos y un 60% de los genes secuenciados no presentaban ningún tipo de homologia. El 22.5% de las secuencias presentaban un dominio con el que presentan varios genes conocidos, pero no se podría relacionar con una función determinada. Por último un 7,5% fueron considerados artefactos de la transposición, es decir, que ésta se había realizado de forma incorrecta por lo que los mutantes correspondientes fueron descartados. El análisis por PCR mostró que una de cada cinco genes presentaron integración homólogo. A partir de los resultados obtenidos se ha podido aislar un gen presuntamente relacionado con la biosíntesis de la pared celular. El gen mutagenizado de la cepa III.18.18 codifica una proteína dedo de zinc de tipo C2-H2 de Y. Lopolytica que se encuentra involucrado en la transición dimórfica. Además hemos aislado dos genes que representan a igual de III.18.18, integración homologa. El mutante I.14.31 presenta alta homología con el gen 2-oxoisovalerato dehigrogenasa y con el gen piruvato deshidrogenasa y el mutante I.12.4 presenta una altahomología con la ribonucleoproteína f. Estudios del mutante de la glutation reductasa de S. Cerevisiate ha mostadro ser hipersensible al calcofluor white, droga que actúa interfiriendo con la formación de microbillas de quitina y B-1,3