Clonación y caracterización del gen ker1 de candida albicans

Resumo

Candida albicans es un hongo patógeno oportunista capaz de provocar infecciones a nivel superficial y sistémico, provocando cifras de mortalidad de hasta el 35% en pacientes inmunodeprimidos. Entre los factores de virulencia de este hongo destaca el dimorfismo que es la capacidad que tiene el hongo de crecer tanto en forma levaduriforme como micelial. En los últimos años, nuestro grupo ha desarrollado una línea de investigación encaminada a la caracterización de componentes celulares con el fenómeno del dimorfismo y de interacción del hongo con el hospedador. En este contexto, el principal objetivo de este trabajo consistió en el aislamiento y caracterización de un nuevo gen mediante elinmunorrastreo de una genoteca de expresión con un anticuerpo policlonal de la forma micelial del hongo (Pab anti-gt). Dicho gen está contenido en el contig 4-3030 (ahora 6-2517) del proyecto de secuenciación del genoma de C.albicans, carece de homología significativa con ninguna secuencia conocida, y contiene un marco abierto de lectura que codifica para una proteína de 1197 aminoácidos, con un peso molecular aproximado de 134 kDa, y con un elevado porcentaje molar de lisina (14,5%) y ácido glutámico )16,7%), por lo que se le ha denominado Ker1p. Ensayos de inmunotransferencia de fracciones celulares con el anticuerpo PAb anti-gt y con un anticuerpo policlonal inmunoespecífico frente a Ker1p (PAb anti-Ker1p), revelaron que Ker1p se localiza en la membrana plasmática de C.albicans. Además, el análisis de la expresión de KER1 reveló que éste se induce en células crecidas en los medios de Lee y M199 a pH alcalino, queda reprimida a pH ácido y está regulado por RIM101, el factor de transcripción que controla el dimorfismo y la expresión de genes dependientes de pH en este hongo. El análisis fenotípico del mutante nulo ker1/ker1, reveló que KER1 debe estar implicado en la biogénesis o composición de la pared celular de