Aislamiento y caracterización del gen sig92/mnudc. Regulación de la acetilhidrolasa del factor activador de plaquetas mnudc

Abstract

En este trabajo se aborda la identificación y caracterización de un gen aislado en condiciones inflamatorias en macrófagos de ratón dentro del proyecto en estudio de la respuesta inflamatoria mediada por macrófagos. Las características en las que fue aislado le confieren además una serie de características propias de los macrófagos que están en una situación de inflamación crónica. La caracterización de su cDNA nos permitió la identificación de este gen como MnudC, e incluirlo dentro de un grupo de proteínas, denominado NUDC, muy conservadas durante la evolución. Estas proteínas fueron implicadas inicialmente en al migración nuclear de Emericella nidulans, pero a medida que se fueron identificando nuevos miembros en otros organismos el número de funciones se ha ido incrementando considerablemente hasta el punto de considerar a estos genes como esenciales para la supervivencia celular. En este trabajo se llevó a cabo la identificación y caracterización del gen, poniendo especial interés en la zona 5' no codificante en cuanto a su importancia como región promotora y reguladora del gen. Hemos verificado la funcionalidad de esta zona como región promotora si como identificado una serie de sitios de unión a factores de transcripción posiblemente implicados en su regulación. Hemos estudiado su expresión tanto en tejidos adultos como a lo largo del desarrollo embrionario así como en células en cultivo sometidas a diferentes estímulos inflamatorios. Nuestros estudios indican que MNUDC está implicado en la regulación de la actividad de enzima PAF-AH(I). Así hemos demostrado que MNUDC se une a la subunidad reguladora b de PAF-AH(I), y como consecuencia de esta unión se produce un incremento en la actividad enzimática del holoenzima PAF-AH(I) sin que haya efecto sobre la subunidad catalítica aislada.