Generación y análisis de mutantes con fenotipo pleiotrópico en el patógeno de peces Flavobacterium psychrophilum

Resumo

Flavobacterium psychrophilum es el agente etiológico de la enfermedad del agua fría que afecta a diferentes especies de salmónidos, de interés en acuicultura. La enfermedad ocasiona, de forma recurrente, importantes pérdidas económicas en el sector. Los aspectos biológicos, así como los relacionados con los mecanismos de patogenicidad de la bacteria, son aún poco conocidos. A ello ha contribuido, sin duda, la dificultad de manipulación y crecimiento que presenta este microorganismo. En el trabajo que aquí se presenta, se ha definido un medio de cultivo que permite el estudio de una de las características biológicas más relevantes de esta bacteria: el movimiento por deslizamiento. Se ha podido constatar que la concentración de nutrientes es un factor determinante, poniéndose de manifiesto que existe una correlación inversa entre ésta y la motilidad. Este medio de cultivo fue, asimismo, la base para poder estudiar mutantes con diferentes capacidades de deslizamiento, lo que ayudará en el estudio del proceso de motilidad de esta bacteria y su posible relación con la virulencia. Los mutantes seleccionados, además del defecto en la capacidad de deslizamiento, presentaron simultáneamente, alteraciones de otros fenotipos, como por ejemplo, en la actividad proteolítica extracelular y en la virulencia. Dos de los mutantes seleccionados con estos fenotipos pleiotrópicos tenían interrumpidos genes que codifican glicosiltranferasas de tipo II. Por otra parte, se ha desarrollado, por vez primera en esta bacteria, y utilizando como modelo los genes fpp1 y fpp2 que codifican sendas proteasas, un sistema que permite la inactivación, de genes específicos mediante mutagénesis insercional. Con ello se logra ampliar el conjunto de técnicas genéticas a aplicar en este microorganismo. El resultado de la mutación de estos genes mostró que la carencia de las proteasas Fpp1 y Fpp2 no tenía influencia alguna, en la virulencia de la bacteria.