Estudio de la función y localización de la proteína no estructural VP5 del virus de la bursitis infecciosa

Resumo

El virus de la bursitis infecciosa (IBDV), perteneciente a la familia Birnaviridae, es un importante patógeno aviar responsable de una enfermedad inmunosupresora que afecta a pollos de gallina doméstica. Las partículas de IBDV son icosaedros desnudos que encapsidan un genoma bipartito formado por RNA bicatenario. Este trabajo se ha centrado en el estudio de la proteína VP5 de IBDV, un polipéptido no estructural dispensable para la replicación de IBDV que juega un papel central en la patogenia provocada por el virus. A pesar de su importancia, al comienzo del presente trabajo la caracterización molecular y funcional de esta proteína era muy pobre. Nuestros estudios han permitido establecer que VP5 se expresa durante todo el ciclo de replicación de IBDV, siguiendo un patrón temporal similar al del resto de proteínas virales. Por otra parte, nuestros resultados demuestran que la proteína VP5 no está implicada en procesos elementales del ciclo de replicación, tales como la replicación/transcripción del genoma, la traducción de proteínas virales o el ensamblaje de la progenie viral. Los datos experimentales obtenidos indican que esta proteína tiene una importancia crítica sobre la capacidad de diseminación del virus. A lo largo de este trabajo se ha determinado que IBDV emplea dos mecanismos para la liberación de la progenie viral. Un mecanismo de liberación no lítico, no descrito anteriormente, dependiente de la expresión de la proteína VP5, que permite la salida de una fracción substancial de la progenie viral durante la fase exponencial del ciclo replicación sin afectar a la viabilidad celular; y un segundo mecanismo de liberación tardío, directamente asociado a la destrucción de la integridad celular. El mecanismo de liberación no lítica incrementa de forma significativa la capacidad de diseminación del virus. Además, en el presente estudio nosotros hemos determinado las bases moleculares del tropismo membranal de la proteína, mostrando que su acumulación en la membrana celular se produce mediante interacciones electrostáticas entre el dominio policatiónico localizado en el extremo C-terminal de la proteína y lípidos aniónicos presentes en la cara citosólica de la membrana plasmática. Mediante ensayos de interacción in vitro empleando matrices lipídicas y diferentes versiones de la proteína purificadas mediante cromatografía de afinidad, se ha determinado que VP5 interacciona de forma específica con diferentes fosfoinosítidos (PIP), preferencialmente con derivados monofosfato de fosfatidilinositol. Finalmente, se ha determinado que la deleción de su dominio de interacción con PIPs reduce significativamente la capacidad de diseminación del virus y la producción de virus extracelular.