Estudios de localización y caracterización enzimática de dinucleosido-trifosfatasa y adp-ribosa pirofosfatasa en fracciones subcelulares particuladas

Resumo

LA DINUCLEOSIDO-TRIFOSFATASA (NP3NASA; EC 3.6.1.29) ES UNA ENZIMA QUE HIDROLIZA ESPECIFICAMENTE DINUCLEOSIDO-TRIFOSFATOS, COMO DIADENOSINA-TRIFOSFATO (AP3A) PRODUCIENDO ADP Y AMP COMO PRODUCTOS. SE CONOCIA LA EXISTENCIA DE FORMAS CITOPLASMATICA Y MITOCONDRIAL DE NP3NASA. EN ESTA TESIS SE HA ESTUDIADO LA LOCALIZACION SUBMITOCONDRIAL DE ESTA, POR MEDIDAS DE LATENCIA, PRECIPITABILIDAD Y EXTRACCION CON DIGITONINA, EN MITOCONDRIAS PURIFICADAS DE HIGADO DE RATA. POR COMPARACION CON MARCADORES ENZIMATICOS DE FRACCIONES SUBMITOCONDRIALES SE HA DEMOSTRADO QUE LA NP3NASA MITOCONDRIAL ESTA LOCALIZADA EN LA MATRIZ DE DICHO ORGANULO. LA ADP-RIBOSA PIROFOSFATASA (ADPRIBASA; EC 3.6.1.13) HIDROLIZA ADP-RIBOSA LIBRE, NO LIGADA A PROTEINAS, PRODUCIENDO AMP Y RIBOSA-5-FOSFATO. SE CONOCIA LA EXISTENCIA DE TRES ADPRIBASAS CON DIFERENTES ESPECIFICIDADES DE SUSTRATO Y CATION DIVALENTE ACTIVADOR EN LA FRACCION SOLUBLE DE HIGADO DE RATA: ADPRIBASA-I, ADPRIBASA-MN Y ADPRIBASA-II. EN ESTA TESIS SE HA DEMOSTRADO QUE EXISTE UNA ADPRIBASA, PARECIDA A LA ADPRIBASA-I, QUE SE MANTIENE ASOCIADA A MITOCONDRIAS SOMETIDAS A CENTRIFUGACION EN GRADIENTES DE SACAROSA Y ESTA LOCALIZADA EN LA MATRIZ MITOCONDRIAL. ESTA ADPRIBASA MITOCONDRIAL SE HA PURIFICADO Y CARACTERIZADO PARCIALMENTE. SE HAN DESCRITO PROPIEDADES DE ESTA ENZIMA QUE NO ERAN CONOCIDAS PARA LA ADPRIBASA-I. POR ELLO SE HAN REALIZADO ESTUDIOS COMPARATIVOS CON ESTA, QUE HAN LLEVADO A LA CONCLUSION DE QUE SE TRATA DE ENZIMAS PARECIDAS, CON DISTINTA LOCALIZACION SUBCELULAR Y, QUIZAS, CON ALGUNA LIGERA DIFERENCIA DE PROPIEDADES CINETICAS Y/O MOLECULARES.