Reacciones alcoholíticas, mecanismo y regulación de la nucleótido- pirofosfatasa o fosfodiesterasa i de mamíferos

Resumo

(A) Empleando ATP como sustrato se ha demostrado la catálisis, por la nucleótido-pirofosfatasa (NPP) de hígado de rata, de reacciones alcoholíticas con diversos alcoholes R-CH sub 2 OH, que dan lugar a AMP-O-alquilos. La eficacia de los alcoholes como agentes solvolíticos se relaciona con su acidez y su competencia con el agua es favorecida por el grupo metileno (CH sub 2). Los resultados se interpretan como consecuencia de la intervención de catálisis general básica para facilitar el ataque nucleofílico por el alcohol y una interacción favorable del grupo CH sub 2 en el centro activo de la enzima. (B) Se ha demostrado que en suero y en fracciones celulares de sangre humana existe también actividad alcoholítica con metanol y etanol, que puede deberse a la presencia de NPP. Ello abre la posibilidad de que puedan formarse AMP-O-alquilos como consecuencia del consumo humano de alcohol. (C) Se ha reinvestigado la inhibición de la NPP de hígado de rata por una preparación comercial de factor de crecimiento acídico de fibroblastos (FGF-1), empleando p-nitrofenil-dTMP como sustrato. Se ha demostrado que la inhibición es producida por EDTA contaminante, identificado y cuantificado por RMN. La inhibición por EDTA es dependiente del tiempo de preincubación, potenciada por glicina y bloqueada por el sustrato. Ello se interpreta como consecuencia de un lento intercambio de cationes divalentes entre la NPP y el EDTA, impedido por el sustrato y favorecido por glicina a través de un efecto conformacional. Trabajo financiado por CICYT (SAF94-0194 y SAF97-0209) y la Consejería de Educación y Juventud, Junta de Extremadura, Fondo Social Europeo (EIA94-09 y PRI97C145).