Estudio del efecto de perkinsus sobre el sistema inmune de la almeja fina(ruditapes decussatus)

Resumo

Las especies del genero Perkinsus han sido asociadas con mortalidades de moluscos bivalvos en todo el mundo, incluyendo Galicia. La histopatología de la infección por Perkinsus en almeja fina, babosa y japonesa, asi como el ciclo de vida del parásito in vivo, fue muy similar a aquella descrita para Perkinsus sp. En otros moluscos bivalvos. Asociada a la presencia del parásito siempre detectamos una fuerte infiltración hemocitaria por parte del hospedador. Para estudiar más en profundidad la respuesta defensiva de la almeja fina infectada por Perkinsus, medimos seis parámetros inmunes en animales muy infectados según la prueba de diagnóstico estándar para Perkinsus, el RFTM, y comparamos los resultados con aquellos obtenidos a partir de animales no infectados. Todos los tratamientos siguieron la misma tendencia en las dos réplicas del experimento, lo cual sugiere un condicionamiento del sistema defensivo de la almeja fina debido a la presencia de Perkinsus. Para disponer de una fuente continua y homogénea del parasito, establecimos y optimizamos cultivos in vitro del mismo. La morfología del aislado en cultivo determinada por microscopía óptica y electronica resultó similar a la descrita para Perkinsus marinus in vitro. Sin embargo, la secuenciación y comparación de una región genómica de unas 1800 pares de bases demostró la gran diferencia existente entre el organismo en cultivo y las demás especies del genero Perkinsus. El análisis filogenético basado en el gen 18S situa al protozoo en cultivo en el límite entre los animales y loshongos, dentro del grupo de los Mesomycetozoa. Mediante análisis de restricción confimamos la presencia tanto de Perkinsus como del organismo en cultivo en aislados de hipnosporas obtenidos de branquias sometidas a la prueba del RFTM. Esto demuestra la falta de especificidad de esta tecnica y su invalidez para el diagnóstico de Perkinsus. Estos resultados nos llevaron a identificar el o