Un estudio integrado das lipasas de thermus thermophilus hb27condicions de produccion, localizacion celular, purificacion e caracterizacion

Resumo

Lipasas y esterasas tienen una gran importancia en un extenso número de productos y procesos industriales, que gracias a ellas pueden realizarse de un modo eficiente y en condiciones suaves. Sin embargo, precisamente esta última ventaja es también la principal limitación de su empleo como catalizadores ya que, en ocasiones, las condiciones que impone la reacción (frecuentemente en términos de pH, temperatura o presencia de disolventes orgánicos) resultan desnaturalizantes par alas enzimas haciendo que pierdan su actividad. Por este motivo, en los últimos años en la industria biotecnológica se ha despertado un gran interés por las enzimas procedentes de microorganismos termofílicos, ya que pueden ¿por sus especiales propiedades- obviar esta limitación. Sin embargo, todavía son pocas las que, a día de hoy, se emplean industrialmente y ello es debido, en buena parte a la ausencia de sistemas de producción y purificación adecuados para enzimas termofílicos, así como al desconocimiento de sus propiedades catalíticas. Así, en esta tesis se estudiaron de forma integral los enzimas lipolíticos de Thermus thermophilus HB27. De modo más concreto, se analizaron en profundidad tanto los aspectos relativos a su producción ¿especialmente la influencia de la composición mineral del medio de cultivo sobre los niveles de producción de biomasa y actividad lipolítica-, como los correspondientes a su purificación ¿a partir de post incubados libres de células y de extractos de enzimas ligados a la membrana-, caracterización y localización molecular. Así mismo, se profundizó en el estudio de los mecanismos implicados en la síntesis y secreción de las enzimas, así como en su comportamiento y sus excepcionales propiedades catalíticas, derivadas de su naturaleza extremófila. En este sentido, resulta también destacable el conocimiento adquirido sobre la dinámica de secreción de los enzimas lipolíticos gracias tanto a la localización y determinación cuantitativa de las diferentes fracciones de los enzimas lipolíticos, como al papel que juegan la formación y presencia de cuerpos multicelulares en el medio de cultivo. Para todo ello, se desarrollaron las metodologías adecuadas para la producción, purificación y modelización de los procesos que concurren en la producción de estas enzimas.