Producción de anticuerpos monoclonales humanos frente a linfocitos b humanos

Resumo

Hemos utilizado la tecnología convencional de obtención de anticuerpos monoclonaes desarrollada por Milstein y Köhler para obtener anticuerpos monoclonales humanos. Para ello hemos utilizado cepas de ratones transgénicos que contienen los transgenes para las cadenas pesadas u y ligeras humanas y que son knock-out para la cadena u y k de ratón. Teniendo en cuenta que la mayoría de las patologías tumorales linfocitarias del sistema inmune derivan de linfocitos B, nuestro principal objetivo fue obtener anticuerpos monoclonales humanos frente a linfocitos B humanos, por lo que utilizamos como célula inmunizante una línea celular con fenotipo de linfocito B maduro (IVP y Hmy-2). Hemos obtenido 13 anticuerpos monoclonales humanos de isotipo IgM/Kappa. La mayoría de los hibridomas mostraron inestabilidad, siendo necesaria la reclonación para el mantenimiento de los clones secretores. La cantidad de IgM que secretan es de aproximadamente 1 ug/mL. Todos los hibridomas obtenidos utilizan exclusivamente el segmento VH1, por tanto, la diversidad de anticuerpos depende de la variabilidad generada en la región CDR3 por la combinación de diferentes segmentos D y J y por inserción de nucleótidos P y N. Existe una mayor variabilidad en la cadena ligera kappa por el uso de varios segmentos Vk y la presencia de un número mayor de mutaciones. El uso de un único gen VH es suficiente para generar un repertorio amplio de anticuerpos, sin embargo, la restauración de la respuesta inmune humoral es deficiente porque sólo encontramos una concentración de las mutaciones somáticas en el CDR1 dellocus Vk1. Basándonos en el patrón de reconocimiento celular diferenciamos 2 grupos de anticuerpos un grupo de Ac anti-células B, con u reconocimiento restricto hacia este tipo celular y otro grupo de Ac anti-leucocitarios, con un reconocimiento extenso dentro de las poblaciones hematológicas. El hecho de haber obtenido distintos anticuerpo