Estudios de viabilidad bacteriana en microcosmos de laboratorio y en el medio marino

Abstract

En esta memoria se aborda el estudio de la viabilidad bacteriana en condiciones controladas de laboratorio, y en el medio marino. Para ello se han empleado diversas técnicas microscópicas, citométricas y de cultivo. 1,- Determinación del número de células totales: Tinción con naranja de acridina, utilización de cámaras de recuento y tinción con el Kit Live/Dead BacLight. 2,- Determinación de la biomasa viable; método de Kogure (medida de la incorporación de sustrato y división celular), reducción de INT o CTC (detección de actividad respiratoria), tinción con kit Live/Dead BacLight (existencia de permeabilidad selectiva de membrana) y siembra en medios de cultivo sólidos. Los estudios en el laboratorio han permitido caracterizar las respuestas de supervivencia de Listonella pelagia y Vibrio splendidus biotipo 1. Ambas especies presentan: 1,- Supervivencia a largo plazo (mayor de 3 meses) en los microcosmos con condiciones más próximas a las existentes en el agua de mar (bajas concentraciones de nutrientes y salinidad del 33 por mil); en este estado, L.pelagia disminuye significativamente su tamaño y se vuelve cocoide, aumentando una banda de proteína de membrana externa de 36 kDa. 2,- Estado viable no cultivable (VNC), inducido a salinidades menores 16 por mil y/o a una concentración de nutrientes de 17 g l-1. Las células VNC de L.pelagia son cocides, pudiendo producirse o no un aumento del biovolumen. No se producen variaciones en los perfiles de proteínas de membrana ni en los lipolisacáridos de la pared celular. L.pelagia se recuperó "in vitro" (tras la incubación con ampicilina a concentraciones bactericidas y penicilinasa) e "in vivo" (tras la inyección en dorada) en 2/19 casos. La ausencia de una secuencia de pérdida de actividades celulares previa a la muerte celular, apunta al estado VNC como estrategia de supervivencia en estas especies. Los estudios realizados con bacteriplancton de l