Genes y enzimas implicados en los últimos pasos de la biosíntesis de cefalosporina C
- VELASCO ALVAREZ, JAVIER
- Juan Francisco Martín Martín Director
- Santiago Gutiérrez Director
Defence university: Universidad de León
Fecha de defensa: 07 July 1997
- Tomás González Villa Chair
- José Luis Barredo Fuente Secretary
- Francisco Javier Ávalos Cordero Committee member
- Paloma Liras Padín Committee member
- Fernando Leal Sánchez Committee member
Type: Thesis
Abstract
En este trabajo nos propusimos afrontar el estudio de los siguientes aspectos relacionados con la biosintesis de cefalospirina c: 1. Se estudio el efecto de la adicion de metionina sobre la produccion de este antibiotico y el posible origen de este efecto a nivel enzimatico y genetico demostrando que la metionina aumenta principalmente el nivel de transcripcion de los genes del "cluster" temprano de biosintesis de cefalosporina c. 2. Se analizaron los niveles relativos de transcripcion de los 4 genes clonados de la ruta biosintetica en tres cepas de diferente nivel de produccion. Se comprobo asi que los genes pcbc y cefef son los que demuestran niveles de expresion mayores, el pcbab se expresa a un nivel algo inferior y el cefg presenta una expresion muy escasa, similar al pyrg del metabolismo primario. 3. Se realizaron estudios bioquimicos sobre la naturaleza del producto del gen cefg de a.Crysogenum que resulto de ser una proteina monomerica de aproximadamente 50kda. 4. Se caracterizaron cepas transformantes de este hongo en las que el gen cefg se habia superexpresado. Estas cepas mostraron mayor actividad dac-acetiltransferasa y mejor capacidad de conversion de dac en cefalosporina c. 5. Por ultimo se purificaron y caracterizaron dos proteinas extracelulares con actividad cpc-acetilhidrolasa. Ambas proteinas aparecen en las ultimas horas de fermentacion y tienen escasa afinidad por la cefalosporina c.