Erradicación de virus y recuperación de cultivares de Pyrus y Malus tradicionales de Galicia , mediante técnicas de cultivo in vitro, para conservación de su germoplasma

Zusammenfassung

Como consecuencia del abandono de la agricultura tradicional y del campo, así como los métodos de propagación, los cultivares tradicionales de Galicia de manzano y peral se encuentran en peligro de extinción o en condiciones fitosanitarias precarias incluso en los bancos de germoplasma donde se almacenan. Desde este marco de referencia en el presente trabajo de investigación se estudia, mediante el uso de técnicas biotecnológicas in vitro, el saneamiento, recuperación y conservación de germoplasma de dos cultivares de Pyrus y ocho de Malus evitando así la pérdida de su biodiversidad. El objetivo final de este proyecto es obtener plantas testadas libres de los principales virus que los afectan, ACLSV y ApMV, utilizando la termoterapia y cultivo in vitro de ápices meristemáticos. Se revisan los principales métodos empleados hasta ahora en la erradicación de virus para el saneamiento de frutales leñosos. A partir de esta revisión y apoyados en el desarrollo de la técnica combinada de terapia de calor y aislamiento de ápices meristemáticos, se pone a punto un modelo combinando las dos técnicas. Los resultados que se obtienen con la aplicación de termoterapia con subida gradual de temperatura desde 25º a 40ºC durante un periodo de 18 días, confirman que es un tratamiento más funcional, de menor duración que afecta menos a las plantas facilitando el aislamiento de meristemos lo que permite regenerar plantas testadas libres de virus. En definitiva, el protocolo diseñado, aplicado para la erradicación de virus en manzano y peral, y comprobado mediante técnicas inmunológicas DAS-ELISA y RT-PCR resulta satisfactorio. Desde esta perspectiva el modelo propuesto resulta altamente valioso al establecer un plan específico aplicable para otros tipos de plantas. Por otro lado, se ha conseguido por primera vez aislar y cultivar cepas de bacterias endófitas que conviven en el interior de los explantos de manzano in vitro. Asimismo, se han identificado en su totalidad, mediante análisis metagenómico de ARN 16S (Illumina) las bacterias que conforman el microbioma interno de todos los cultivares seleccionados, así como la existencia de bacterias endófitas predominantes en cada uno de ellos