Aplicación de la electroforesis bidimensional en diferentes especiesVibrio tapetis, Pseudoscleropodium purum y Mus musculus

Resumo

En esta Tesis Doctoral se utilizó la electroforesis bidimensional alta resolución como la herramienta principal de análisis en el estudio de diversas problemáticas en diferentes especies. La elección de la electroforesis bidimensional como herramienta central para el análisis de las diferentes cuestiones se basa a que esta técnica permite separar cientos de proteínas en un solo experimento, y sigue siendo actualmente uno de los métodos más eficaz para la separación de mezclas complejas de proteínas. Por lo tanto, a pesar de la enorme complejidad de los procesos biológicos y de la cantidad de proteínas existentes, el uso de esta técnica hace posible descubrir nuevas proteínas asociadas a procesos celulares normales, proteínas relacionadas con la adaptación de los organismos ó células a condiciones fisiológicas o ambientales cambiantes, que de otra forma serían muy difíciles de descubrir o estudiar. El objetivo principal de esta Tesis ha sido la puesta a punto y aplicación de la electroforesis bidimensional en diversos grupos taxonómicos: Vibrio tapetis (Bacteria), Pseudoscleropodium purum (Briófitos) y Mus musculus (Mamíferos) utilizando un buffer de extracción de proteínas común para todos los estudios. Dentro del estudio de cada grupo taxonómico se persiguieron diferentes objetivos secundarios, los cuales se detallan a continuación: 1. Objetivos del estudio en Vibrio tapetis: Obtención del primer mapa proteómico de referencia de las dos cepas más importantes de Vibrio tapetis implicadas en la enfermedad del Anillo Marrón que afecta a almejas, para poder conocer y estudiar las similitudes y diferencias de estas dos cepas a nivel proteico. 2. Objetivos del estudio en Pseudoscleropodium purum: Obtención de evidencias sobre la adaptación fisiológica del musgo a la contaminación atmosférica, mediante el estudio de alteraciones proteicas en trasplantes cruzados de musgos entre zonas libres de contaminación y zonas con contaminación atmosférica. 3. Objetivos del estudio en Mus musculus: Aplicación de la electroforesis bidimensional como vía de entrada en el estudio de función del gen pitx2 durante el desarrollo cardiaco, mediante la búsqueda de proteínas alteradas en los corazones adultos de ratón debidas a la inhibición del gen pitx2 durante el desarrollo cardiaco fetal. Durante la realización de esta tesis se publicaron dos artículos de revisión del estado de la metodología. Estas publicaciones son la consecuencia del intenso estudio y revisión de la metodología existente para la puesta a punto y aplicación de la electroforesis bidimensional en las especies anteriormente mencionadas. Al final de la realización de esta Tesis Doctoral se consiguieron completar los objetivos planteados en esta tesis de forma satisfactoria. Los resultados y conclusiones de cada uno de los objetivos se encuentran detallados en sus respectivas secciones de la presente Tesis Doctoral.