Estudio del mecanismo de acción de ficotoxinas marinas de reciente apariciónazaspirácidos e iminas cíclicas

  1. Carolina Bueno Wandscheer
Dirixida por:
  1. Natalia Vilariño Director
  2. Luis Miguel Botana López Director

Universidade de defensa: Universidade de Santiago de Compostela

Ano de defensa: 2010

Tribunal:
  1. Mercedes Rodríguez Vieytes Presidenta
  2. José Gil Longo Secretario
  3. María de las Mercedes Álvarez Alcalde Vogal
  4. Jorge Lago Vogal
  5. Ana M. García Cabado Vogal
Departamento:
  1. Departamento de Farmacoloxía, Farmacia e Tecnoloxía Farmacéutica

Tipo: Tese

Teseo: 304434 DIALNET

Resumo

Los azaspirácidos y las iminas cíclicas son ficotoxinas marinas descubiertas en los años 90. La intoxicación por azaspirácidos a través del consumo de mejillones ha emergido en los últimos años como un problema sanitario en Europa. No obstante, no hay evidencia de intoxicaciones en humanos por espirólidos o gymnodimina por el consumo de mariscos. La elucidación del mecanismo de acción de los azaspirácidos y de las iminas cíclicas ayudaría a estimar los riegos y/o amenazas para los consumidores de mariscos. En esta tesis se demuestra el efecto citotóxico del azaspirácido-2 y el azapirácido-2-metil éster en cultivos de células de cerebelo. La neurotoxicidad del azaspirácido-2 y del azaspirácido-2-metil éster parece regulado por el desarrollo, visto que, se observó una alta citotoxicidad en células jóvenes (2-3 días in vitro). Estudios previos in vitro en cultivos celulares sugirieron la implicación de la activación de las caspasas en la apoptosis inducida por el azaspirácido. En este estudio, si determino que la ruta extrínsica de la apoptosis es activada por el azaspirácido-1 en células de neuroblastoma. Igualmente se observó la activación de las caspasas iniciadoras 8 y 10 por el azaspirácido-1. Además las rutas de producción de la ceramida, a través del catabolismo de la esfingomielina de la membrana y por la síntesis de novo, participan en la citotoxicidad inducida por el azaspirácido-1 en células de neuroblastoma. También se estudio en esta tesis doctoral el efecto de tres compuestos del grupo de las iminas cíclicas en receptores muscarínicos de acetilcolina (mAChR) utilizando células de neuroblastoma humano. El 13-desmetil espirólido C y el 13,19-didesmetil espirólido C inhibieron la respuesta del calcio intracelular estimulada por la acetilcolina con una potencia similar y causaron una reducción de la respuesta máxima de la acetilcolina en el incremento del calcio intracelular en presencia de ambas toxinas. La inhibición de la respuesta del calcio intracelular por los espirólidos es persistente después de la retirada de las toxinas indicando un efecto irreversible. La gymnodimina también inhibió la respuesta del calcio intracelular en los mAChR inducida por la acetilcolina, sin embargo con un aumento de la concentración de acetilcolina se observo la recuperación de la respuesta máxima del calcio intracelular en presencia de la toxina, sugiriendo que la gymnodimina es un antagonista competitivo reversible de mAChR. El 13-desmetil espirólido C también redujo la unión del antagonista mAChR específico [3H]QNB en las células de neuroblastoma. El efecto del 13-desmetil espirólido C persiste después de lavar la toxina y fue inhibida por la protección del sitio primario de unión con alta concentración de atropina sugiriendo una interacción del espirólido con el sitio de unión ortólogo del mAChR. Además, la toxina indujo una alteración en la característica del receptor muscarínico M3 asociado a la membrana, aunque el espirólido no alteró el nivel total de proteína M3 mAChR. Los resultados obtenidos contribuyen para un mejor entendimiento del mecanismo de acción de los azaspirácidos y podrían tener importante implicación toxicológica en el mecanismo de acción de las iminas cíclicas.