Detección de mutaciones en el gen cftr mediante la técnica de rastreo de alta resolución hrm e identificación de las mismas por secuenciación de nueva generación en el diagnóstico genético de la fibrosis quística

Zusammenfassung

La fibrosis quística, es la enfermedad grave de herencia autosómica recesiva más frecuente en la raza caucásica. Se caracteriza por una alteración de la función de las células epiteliales del árbol bronquial y de las glándulas exocrinas. La casi totalidad de los pacientes desarrolla una enfermedad pulmonar crónica y progresiva, que es la causa más frecuente de la morbi-mortalidad. En el 85% de los casos existe disfunción pancreática (exocrina y endocrina). Aunque también son frecuentes las alteraciones hepatobiliares y genitourinarias, con azoospermia obstructiva en los varones, la insuficiencia pancreática y la enfermedad pulmonar son las que determinan la gravedad del proceso así como su pronóstico. Es una enfermedad genética causada por mutaciones en el gen CFTR. Con una alta heterogeneidad molecular y una amplia expresión fenotípica. Se han descrito hasta la fecha 2.002 mutaciones en el gen CFTR de las cuales tan sólo el 30% tiene una frecuencia mayor del 0,1%. La búsqueda de mutaciones raras viene condicionada por el tamaño del gen CFTR. En esta tesis se ha evaluado la sensibilidad de la técnica de rastreo de mutaciones High Resolution Melting (HRM) en la detección de mutaciones y su utilidad como método de presecuenciación para el gen CFTR. Además, y debido al impacto que ha producido el desarrollo en los últimos años de la secuenciación masiva (Next Generation Sequencing, NGS) en el campo de la investigación molecular, se ha analizado la sensibilidad de esta técnica para su aplicación en el diagnóstico de la fibrosis quística. En resumen, en este trabajo se ha abordado el diagnóstico genético de la fibrosis quística con las técnicas moleculares más actuales para la detección y caracterización de mutaciones en el gen CFTR, con el objetivo de llegar al diagnóstico genético definitivo de la fibrosis quística y patologías asociadas a este gen. Se ha establecido un algoritmo diagnóstico para la fibrosis quística que permite alcanzar una sensibilidad diagnóstica del 98%.