Proteinas integrales de membrana de peroxisomas de guisante (pisum sativum)caracterización y estudio del sistema generador de radicales superóxido

Resumo

En la presente memoria doctoral se ha llevado a cabo, por primera vez, la identificacion de los polipeptidos integrales de membranas de peroxisomas (pimp) especializados de hojas. Los polipeptidos mayoritarios tienen masas moleculares de 32, 56, 61, 18, y 29 kda, y no se ha identificado la presencia de glicoproteinas. Los polipeptidos de 56, 43, 32 y 29 kda muestran reaccion cruzada con anticuerpos policlonales frente a pimp de origen animal. Los plipeptidos de 32, 35, y 43 kda han sido identificados comohemoproteinas, y el de 32 kda es una flavoproteina con actividad nadh: ferricianuro reductasa. Mediante estudios con distintos anticuerpos policlonales y espectrofotometria diferencial se ha podido comprobar que el pimp de 18 dka es muy probablemente el citocromo b5. Por otro lado, los estudios en plantas de guisante del efecto del estres salino y del xenobiotico clofibrato sobre el patron de los polipeptidos integrales de membranas de peroxisomas de hojas, indican que los polipeptidos de 43 kda y de 10 kda podrian estar implicados en el mecanismo molecular del estres salino, y los de 43, 32 y 29 kda parecen estar relacionados con el mecanismo del estres por clofibrato. La investigacion de la produccion de radicales superoxido por membranas de peroxisomas de hojas muestra que existen por lo menos tres proteinas distintas implicadas en la generacion de radicales superoxido. Una de ellas es la flavoproteina nadh: fcrasa de 32 kda, que utiliza nadh como donador electronico. La segunda proteina es el pimp de 18 kda (el citocromo b5), que usa tambien nadh como donador electronico, y que es el generador mas importante de superoxido de las membranas peroxisomales. La tercera proteina es el pimp de 29 kda, que requiere nadph como donador electronico y que muestra actividad nadph: ccrasa.