Detección de norovirus y virus de la hepatitis A en moluscos y muestras clínicasgenotipado y estudio poblacional

Zusammenfassung

Los virus entéricos son un grupo de virus que se encuentran en el intestino humano, se excretan en las heces y son transmitidos mediante la ruta fecal-oral. En la actualidad, este grupo de virus está considerado como la causa más frecuente de enfermedades asociadas al consumo de alimentos. En Galicia, la acuicultura marina es una actividad con gran desarrollo, siendo la modalidad principal el cultivo de moluscos bivalvos, sobre todo de mejillón. Los moluscos bivalvos son organismos filtradores que pueden concentrar y retener patógenos humanos que se encuentran en ecosistemas acuáticos contaminados con aguas residuales. Los virus entéricos persisten en los moluscos durante un largo período de tiempo y dado que no somos eliminados por procesos de depuración, crean un mayor riesgo para la salud pública cuando el consumo de estos animales se realiza en crudo o cocinados de forma muy ligera. Se detectó la presencia de distintos virus entéricos en moluscos procedentes de países productores y/o consumidores, incluidos Europa y Asia, aunque únicamente en el caso de Norovirus (NoV) y virus de la hepatitis A (HAV) se pudo asociar el desarrollo de brotes de la enfermedad con el consumo de moluscos. La aparición periódica de brotes asociados a enfermedades transmitidas por moluscos provoca importantes pérdidas económicas en la acuicultura marina. Dentro de los virus considerados como entéricos, cabe destacar la importancia de NoV en términos epidemiológicos. Los NoV son la principal causa de brotes de gastroenteritis aguda en todo el mundo. No obstante, la prevalencia de NoV como causa de casos esporádicos de gastroenteritis aguda está mucho menos documentada y probablemente se encuentra infraestimada, debido principalmente la a la ausencia de diagnóstico rutinario. HAV es la causa más común de hepatitis a nivel global, siendo la enfermedad más grave causada por los virus transmitidos vía fecal-oral. Los objetivos de este trabajo son: i) la monitorización de la presencia de NoV y HAV en muestras de moluscos (Mytilus galloprovincialis) procedentes de distintas zonas de la ría del Burgo (La Coruña), evaluando la correlación existente entre el número de muestras de moluscos positivas para estos virus y la actual clasificación de las áreas de crecimientos de moluscos, ii) evaluar el papel de NoV como agente etiológico de casos esporádicos de gastroenteritis en pacientes del área sanitaria de la Coruña, iii) la caracterización mediante análisis genético de las cepas encontradas de cada grupo viral en ambos tipos de muestras y iii) establecer la posible relación epidemiológica existente entre los casos de hepatitis A y gastroenteritis causada por NoV y el consumo de moluscos bivalvos mediante el análisis filogenético de las cepas detectadas. Los moluscos llegarán al laboratorio un día después de su recolección. Las muestras de heces se recibirán en el laboratorio semanalmente. Ambos tipos de muestras se procesarán para la posterior extracción de RNA. La extracción del RNA se realizará empleando el kit NucleoSpin RNA Virus (Macherey-Nagel, Alemania). La detección de virus entéricos se basa principalmente en el uso de técnicas moleculares. Se empleará la RT-PCR en tiempo real (Real-Time RT-PCR) con sonda TaqMan para la detección de NoV y HAV. Esta técnica permite la posibilidad de realizar una cuantificación viral, además de presentar una mayor sensibilidad, especificidad que la RT-PCR convencional. Después de la detección viral, los positivos obtenidos serán caracterizados mediante análisis genético. En el caso de NoV, secuenciará si una región parcial de la cápside y, en el caso de HAV, las regiones de unión VP1-P2A y VP3-VP1. La secuenciación de los positivos de los diferentes grupos virales permitirá conocer la heterogeneidad de la secuencia nucleotídica y podrán diferenciarse, mediante análisis filogenético, los diferentes genotipos encontrados para cada grupo viral estudiado.