Aplicación de la PCR en tiempo real para la detección de patógenos en la industria alimentaria

Zusammenfassung

Existe un gran número de bacterias patógenas que pueden afectar al ser humano al infectarse, este último, a través de los alimentos. Las manifestaciones clínicas pueden variar, desde simples molestias intestinales a la muerte en los casos más graves. Por esto, es cada vez más importante disponer de sistemas de detección que permitan evitar la introducción de estos microorganismos dentro de la cadena alimentaria. Por otro lado la importancia del desarrollo y aplicación de nuevos métodos no sólo radica en su fiabilidad para detectar posibles amenazas alimentarias. Desde el punto de vista de la industria deben ser rápidos para evitar posibles pérdidas económicas debidas a la retención de productos perecederos o de vida útil breve. El tiempo es un factor muy importante al tratarse de análisis microbiológicos. Los métodos de microbiología tradicional suelen tener varios pasos de siembra y confirmación, lo que puede retrasar los resultados varios días. Los avances técnicos han permitido desarrollar métodos que cumplan las dos premisas anteriores, rapidez y fiabilidad, además de su fácil aplicación en la industria. Uno de estos métodos es la reacción en cadena de la polimerasa, en concreto la PCR en tiempo real que utiliza sondas fluorescentes para realizar la detección de los genes diana. Permite mejorar la especificidad y los límites de detección de otros métodos. Presenta una serie de ventajas añadidas sobre los métodos de PCR convencional, como pueden ser la reducción de manipulación de sustancias peligrosas, mayor rapidez por no necesitar ningún tipo de análisis post-amplificación, etc. Salmonella spp, Shigella spp, Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus y Vibrio vulnificus";" son todos importantes patógenos humanos. El presente proyecto de tesis se centrará en la detección de estos microorganismos mediante PCR en tiempo real, no solo individualmente, sino también varios de ellos de modo simultaneo en una única PCR (Multiplex).