Estudio in vitro del minisatélite MsH42análisis poblacional y localización en el genoma humano, comparación de la capacidad recombinogénica de los alelos e interacción con proteínas nucleares

Resumen

Anteriormente, habíamos descrito un minisatélite humano rico en G+C, denominado MsH42, con dos alelos: largo y corto. En este trabajo hemos identificado un tercer alelo de longitud intermedia y hemos localizado el locus MsH42 en el cromosoma 15q25,1. Dentro de un intrón perteneciente a un gen de función desconocida. El potencial recombinogénico de los tres alelos se ensayó in vitro incubando plásmidos, construidos clonando en pBR322 dos copis de las variantes alélicas del minisatélite MsH42 con sus secuencias flanqueantes, en presencia de extractos nucleares de testículos de rata. Este sistema experimental fue diseñado para detectar entrecruzamientos y no conversación génica. Todos los alelos de MsH42 potencian la recombinación homóloga intramolecular, promoviendo altas tasas de entrecruzamiento igual (76%), siendo el alelo largo el que mostró una mayor actividad recombinatoria. La eliminación de las secuencias flanqueantes del alelo largo de MsH42, idénticas a las de los otros alelos, provocó un descenso en la potenciación de la recombinación y en la frecuencia de entrecruzamientos de tipo igual, sugiriendo que estas secuencias homólogas. La detección de algunos eventos recombinatorios complejos dentro del minisatélite MsH42 sugiere la existencia de procesos relacionados tanto con el slippage como con la disociación y reinvasión durante la síntesis reparadora del DNA. Nuestros resultados apuntan hacia la existencia de dos rutas bioquímicas para la iniciación y resolución de eventos recombinatorios en el minisatélite MsH42. Así mismo, hemos detectado la existencia de interacciones específicas producidas por proteínas procedentes de extractos nucleares somáticos y germinales con diferentes grupos de repeticiones del minisatélite, así como también con zonas de las secuencias no repetitivas que lo flanquean, observándose patrones de interacción distintos con ambos tipos de extractos. Además, la adicci