Desarrollo de nuevas técnicas de detección de ficotoxinas diarreicas

Abstract

La creciente incidencia a nivel mundial de los episodios tóxicos de tipo DSP, hace que la situación actual en el campo de la detección de este tipo de toxinas se caracterice por la falta de una técnica que combine la precisión de la metodología analítica instrumental directa con la cuantificación de la actividad biológica. La detección del ácido okadaico (AO) y de sus derivados la dinofisistoxinas (DTXs) es muy importante por su incidencia directa sobre la salud pública, y no solo por los efectos agudos que producen, sino también por su potencial efecto crónico. Surge entonces la necesidad de combinar la cuantificación de las toxinas con la evaluación del riesgo toxico. La clave de una técnica alternativa reside en su mecanismo de acción: El AO es un inhibidor potente y especifico de las fosfatasas de proteína 1(PP1) y 2A (PP2A), dos de las principales fosfatasas de proteína del citosol de células de mamíferos que defosforilan los residuos serina y treonina. En este trabajo se han simplificado y mejorado los métodos funcionales que utilizan PP2A, valiéndose para ello de la mayor sensibilidad que aporta la utilización de la fluorescencia en vez de la colorimetría. Se desarrolló un ensayo de inhibición enzimática con sustratos más sensibles, lo que permite detectar cantidades más pequeñas de toxina. Las ventajas del ensayo fluorescentes de inhibición de fosfatasas de proteína sobre otros métodos analíticos son la eliminación de los pasos de limpieza y el incremento de sensibilidad, especificidad, exactitud y rapidez, asegurando la fiabilidad toxicológica de los moluscos. Este ensayo se ha aplicado con éxito a la detección de microcistina-LR, potente hepatotoxina producida por cianobacterias, con un mecanismo de acción similar. Sin embargo la utilización de preparados de células intestinales de yeyuno de conejo, eligiendo como parámetro a evaluar la captación de D-glucosa, no dio resultados satisfactorios en la detección de estas toxinas