Desarrollo de técnicas de identificación, detección y purificación de toxinas lipofílicas

Resumo

La intoxicación por el consumo de toxinas de origen marino, debidas a la ingestión de moluscos y peces contaminados, es un peligro que puede ocurrir en todo el mundo. Las toxinas marinas comprenden un amplio espectro de sustancias que tiene una estructura molecular, un mecanismo de acción y una actividad biológica muy diversa. Las toxinas que pertenecen al grupo de las iminas cíclicas se caracterizan por poseer sistemas de anillos cíclicos comunes a todas ellas y por la presencia de un grupo imina que presenta actividad farmacológica y toxicológica. Este grupo engloba varios compuestos como pinatoxinas, pteriatoxinas, espiroprorocentriminas y espirólidos. De todos ellos, los espirólidos son el subgrupo de toxinas iminas cíclicas más estudiadas por poseer un amplio rango de distribución mundial. En la presente tesis doctoral se desarrollarán, en primer lugar, distintos métodos de identificación, cuantificación y purificación de estás toxinas. Es muy importante disponer de estas toxinas puras y en cantidad suficiente para poder conocer su diana y buscar métodos de detección. El material utilizado para la extracción de las toxinas espirólidos (toxinas lipofílicas) serán varios cultivos de agua con el dinoflagelado de la especie Alexandrium ostenfeldii (A.ostenfeldii). Este organismo es productor de las toxinas espirólidos, pero también produce neurotoxinas asociadas al grupo de las PSP (Paralytic Shellfish Poisoning). Para la identificación de las toxinas se pondrá a punto un método por espectrometría de masas LC-MS (liquid chomatography-mass spectrometry) utilizando un equipo Q-Trap de Applied Byosystems. Se realizará un estudio exhaustivo de las propiedades de los espirólidos en el instrumento para poder conocer sus pesos moleculares, forma de ionizarse, procesos de fragmentación de los compuestos, etc. Para la obtención de los compuestos puros se pondrá a punto un protocolo de extracción y limpieza de las muestras con distintos disolventes y posterior purificación en HPLC (High performance liquid chomatography) en escala preparativa designando tipo de columna cromatográfica, fase móvil, temperatura, flujo, etc. Se harán estudios para identificar el mecanismo de acción de dichas