Caracterización de la variabilidad intraespecífica en "Philasterides dicentrarchi", agente etiológico de la escuticoliatosis del rodaballo en cultivo

Resumo

CARACTERIZACIÓN DE LA VARIABILIDAD INTRAESPECÍFICA EN Philasterides dicentrarchi, AGENTE ETIOLÓGICO DE LA ESCUTICOCILIATOSIS DEL RODABALLO EN CULTIVO Philasterides dicentrarchi es un parásito histiófago que provoca la escuticociliatosis en el rodaballo cultivado, entre otras especies, causando enormes pérdidas en la acuicultura. La problemática de la escuticociliatosis se ve agravada en la actualidad por la inexistencia de medidas de control efectivas y por la incapacidad de predecir y prevenir las infecciones. Nuestro grupo de investigación ha desarrollado una vacuna inactivada que provoca, tras su administración vía intraperitoneal, una protección muy buena y duradera frente a la infección experimental, si bien no ofrece una protección generalizada frente a todos los brotes de escuticociliatosis aparecidos en diferentes plantas de cultivo. Estos resultados parecen indicar que podemos encontrarnos ante infecciones producidas por diferentes especies de escuticociliados o por diferentes cepas del parásito, con diferencias antigénicas significativas a nivel de los antígenos protectores. Puesto que hasta el momento no existe una información veraz sobre la epidemiología de la escuticociliatosis en las piscifactorías gallegas y también se desconoce si existen varias especies/cepas de escuticociliados, es fundamental conocer y caracterizar con detalle el/los agente/s etiológico/s de esta infección en el rodaballo para desarrollar con rigor una vacuna que genere una protección global frente a esta patología. Por tanto, en el presente estudio nos marcamos los siguientes objetivos: ¿ Investigar la posible existencia de cepas de Philasterides dicentrarchi mediante análisis morfológicos, ecofisiológicos, serológicos y genéticos en piscifactorías comerciales de rodaballo de Galicia y Portugal. ¿ Determinar la metodología más rápida y eficaz para la caracterización de aislados en brotes de escuticociliatosis. ¿ Caracterizar los principales antígenos del ciliado y analizar la respuesta inmunitaria y protección inducida en el rodaballo tras la infección/inmunización con los aislados. Metodología En resumen, en este trabajo se han caracterizado siete aislados de Philasterides dicentrarchi de diferentes orígenes geográficos utilizando distintos tipos análisis: morfológicos, genéticos, serológicos y de protección cruzada y ecofisiológicos (de crecimiento y resistencia a compuestos químicos), con el fin de determinar el más rápido y eficaz para conseguirlo. También se ha analizado a fondo la variación intraespecífica del parásito en una misma piscifactoría de rodaballo. CONCLUSIONES 1. Los análisis morfométricos realizados en siete aislados de Philasterides dicentrarchi obtenidos de piscifactorías de España y Portugal indican una variabilidad morfológica entre ellos, que se localiza fundamentalmente en el ancho de la policinétida 3, la longitud de la membrana paraoral 2, la longitud del campo bucal, el ancho corporal, el ratio longitud/ancho, la longitud corporal, el ancho de la policinétida 1 y la distancia entre las policinétidas 2 y 3. 2. Los aislados de P. dicentrarchi muestran también claras diferencias en las tasas de crecimiento y conjugación y en la susceptibilidad al peróxido de hidrógeno. Sin embargo, los ciliados presentan una susceptibilidad similar al formol y al resveratrol. 3. Los aislados muestran una variación genética intraespecífica en las secuencias de los genes ARNr 18S, Cox1 y ß-tubulina. El análisis del gen ARNr permite agruparlos en dos genotipos mientras que el análisis de los otros dos genes genera un agrupamiento en 6 y 5 genotipos, respectivamente. 4. Los ensayos serológicos y de protección permitieron el agrupamiento de los siete aislados en dos grandes grupos, entre los que la protección cruzada inducida es nula o muy baja. A su vez, dentro de cada grupo, los aislados presentan diferencias antigénicas entre sí e inducen protección cruzada parcial, que puede ser más o menos relevante dependiendo de la pareja utilizada en la vacunación/reto. 5. Los estudios morfológicos y ecofisiológicos no parecen ser de utilidad para la identificación de cepas en este ciliado, aunque sí son necesarios para la identificación de la especie o el establecimiento de programas de control de la escuticociliatosis. Los análisis genéticos y serológicos permiten una discriminación entre cepas más fiable. Para los primeros, el gen de la ß- tubulina ofrece unos resultados aceptables. Para los segundos, es necesario utilizar antisueros de ratón, con mayor poder discriminante que los de rodaballo, y seleccionar la cepa adecuada para generar el antisuero utilizado en el inmunoblot. 6. En una misma piscifactoría pueden coexistir varias cepas de P. dicentrarchi y participar simultáneamente en un mismo brote de escuticocilatosis. Por este motivo, a la hora de diseñar una vacuna para una piscifactoría particular es necesario determinar previamente los serotipos/genotipos que están causando las infecciones, y averiguar si inducen protección cruzada.