Estudio de la estimulación "in vitro" de la recombinación homóloga intramolecular mediada por el minisatélite humano MsH42

Resumo

En el presente trabajo hemos estudiado la estructura y posible función biológica de la secuencia minisatélite MsH42. El análisis por PCR de la región minisatélite muestra un bajo nivel de polimorfismo con dos formas alélicas diferenciadas por un fragmento de 105 pb que se encuentra duplicado en uno de los alelos. Además, el minisatélite sufre deslizamientos durante la replicación en las reacciones de amplificación, indicando la capacidad que tiene para la generación de lazos de cadena sencilla. En experimentos de band-shifting, empleando extractos nucleares de testículo de ratón y células humanas NC-37, se observa la existencia de proteínas nucleares que se unen especificamente a la región de MsH42. Estas características, unidas a la presencia de distintos motivos recombinatorios, nos ha llevado a investigar su posible capacidad recombinogénica. Para comprobar esta hipótesis en términos de recombinación homóloga intramolecular, construimos dos plásmidos, uno conteniendo 2 copias de la región minisatélite y el otro conteniendo 2 copias de una secuencia localizada en el extremo 5' de MsH42. En los ensayos de recombinación encontramos que: i) la región MsH42 estimula fuertemente la recombinación homóloga intramolecular in vitro (22 veces más que la secuencia control) solamente cuando la fuente biológica del extracto proteico fueron testículos de ratón; esto sugiere que MsH42 podría ser un "hotspot" de recombinación meiótica. ii) existe una relación directa entre la frecuencia de entrecruzamientos iguales y la potenciación de la recombinación. Esto provee una explicación para el bajo polimorfismo observado en la población. iii) la tercera unidad repetitiva (TGGGAGAGGC) es un punto importante en el desarrollo de los entrecruzamientos desiguales que llevan al acortamiento del minisatélite.