Desarrollo de técnicas de detección de toxinas marinas basadas en la unión ligando-receptor

Resumo

Las ficotoxinas marinas son metabolitos producidos por algunas especies de microalgas fitoplanctónicas presentes en aguas saladas. La proliferación excesiva de fitopláncton produce fenómenos conocidos con el nombre de "Mareas Rojas", que abarcan una amplia variedad de episodios tóxicos, distintos en función del tipo de toxinas producidas. Estas toxinas son acumuladas principalmente por moluscos bivalvos y peces durante el proceso de filtración de agua marina. Estos productos marinos son utilizados más tarde como alimentos para el consumo humano, produciendo importantes efectos tóxicos sobre la salud pública. El método oficial para la detección de estas tóxinas es el bioensayo de ratón, pero este método supone el sacrificio de animales, es poco reproducible, da lugar a falsos positivos. El objetivo de presente tesis doctoral es el desarrollo de una técnica que permita determinar de forma rápida y fiable la presencia y concentración de toxinas marinas en productos pesqueros mediante estudios ligando-receptor, utilizando como ligando diferentes tipos de toxinas y como receptor su correspondiente diana celular. Para detectar la unión se utiliza un biosensor de afinidad que mide las variaciones ópticas que se producen en función de la cantidad de complejo que se forma, permitiendo además calcular las constantes cinéticas de la unión. En este trabajo se estudia la unión de la yesotoxina a las PDEs celulares utilizando esta técnica y se desarrolla un método de detección de esta toxina. También se estudia la unión de otras toxina, la Palitoxina, y su posible diana celular, la ATPasa de Na, K. Las conclusiones de este trabajo son: 1,- La yesotoxina se une a las fosfodiesterasas celulares de forma reversible y dependiente de la concentración de toxina, siendo la constante de disociación en el equilibrio de esta unión 3.74 micromolar. 2,- El biosensor de afinidad permite detectar y cuantificar la yesotoxina