Caracterización de la señal de Calcio, regulación del pH, y liberación de Histamina en la línea celular HMC-1

Zusammenfassung

Los mastocitos tienen una importancia fundamental en procesos inflamatorios e inmunitarios del tipo de alergias, urticarias, así como en enfermedades autoinmunes. Para su estudio, se han venido empleando habitualmente mastocitos de rata, mastocitos obtenidos mediante el cultivo de células precursoras hematopoyéticas, así como diversas líneas celulares. De entre estas últimas, la línea HMC-1 es la mejor conocida y más ampliamente utilizadas, siendo su origen humano una gran ventaja a la hora de poder extrapolar los datos que se obtengan de su estudio al conocimiento de los mastocitos humanos. El objetivo de esta tesis es caracterizar el proceso de activación de la línea HMC-1, que es aún poco conocido. Para ello, se utiliza el parámetro de liberación de histamina. Además, se quiere estudiar la posible influencia sobre dicho proceso de dos importantes rutas metabólicas, que participan en la regulación de numerosos procesos celulares: * La señal de calcio, un segundo mensajero universalmente reconocido. * El pH intracelular, un parámetro físico-química que en estudios previos apunta un posible papel como nueva señal de transducción. Las conclusiones de este trabajo son: 1,- Una alcalinización intracelular es, por sí sola, una señal suficiente para desencadenar la exocitosis en células HMC-1. 2,- En células HMC-1, un incremento de calcio citosólico no es una señal suficiente para inducir liberación de histamina. 3,- Las células HMC-1 presentan reservorios intracelulares de calcio modulables por diversos fármacos, cuyo vaciado induce una entrada de calcio a través de canales SOC. 4,- En células HMC-1, una alcalinización intracelular activa la salida de calcio a través de la ATPasa de calcio de la membrana plasmática. 5,- La estimulación de la PKC incrementa la alcalinización intracelular y la liberación de histamina inducidas por el cloruro amónico en células HMC-1. 6,- En c