Caracterización molecular de los sistemas de transporte de hierro en "Photobacterium damselae", análisis de la variabilidad genética y presencia de elementos móviles

Zusammenfassung

Photobacterium damselae es una gamma-proteobacteria perteneciente a la familia Vibrionaceae y que actualmente engloba a dos subespecies: P.damselae subsp.piscicida (Agente causal de la pasteurelosis en peces) y P.damselae subsp.damselae. Entre los objetivos de la presente Tesis nos planteamos caracterizar genéticamente algunos de los factores que contribuyen a la virulencia de P.damselae subsp.piscicida, con especial énfasis en los sistemas de adquisición de hierro. Asimismo, hemos analizada diversidad genética existente entre cepas de esta subespecie, y determinado algunas de las divergencias genéticas entre cepas en las dos subespecies de P.damselae. Como punto de partida hemos identificado en primer lugar el gen que codifica la proteína Fur (ferric uptake regulator), cuya secuencia ha mostrado una homología del 99,3% entre las dos subespecies de P.damselae, diferenciándose la proteína es un único aminoácido de los 148 que consta. Además, hemos demostrado que Fur actúa en P.damselae como un regulador transcripcional dependiente de las concentraciones de hierro del medio. Por otra parte se ha identificado y caracterizado un sistema de captación de grupos hemo como fuente de hierro en las dos subespecies de P.damselae compuesto por las proteínas HutA, TonBExbBD, HutBCD y HutWXZ. Dicho sistema mostró una elevada similitud con las proteínas de los sistemas de captación de hemo de otros miembros de la familia Vibrionaceae, y una identidad cercana al 100% entre ambas subespecies. Sin embargo, hemos detectado indicios de microevolución intraespecífica en este sistema: el gen del receptor de membrana externa hutA se encuentra interrumpido constituyendo un pseudogen en muchas de las cepas de piscicida. Curiosamente, las únicas cepas de las subsp.piscida que poseen el gen hutA intacto constituyen una posible línea clonal de aislados procedentes de Japón. El sistema de captación de hemo se expresa in vivo durante la infección de P.damselae subsp.pis