Ficotoxinas marinasmétodos de detección en extractos de molusco

  1. Eva Fonfria Subiros
Dirixida por:
  1. Luis Miguel Botana López Director
  2. Natalia Vilariño Director

Universidade de defensa: Universidade de Santiago de Compostela

Ano de defensa: 2009

Tribunal:
  1. Christopher Elliott Presidente/a
  2. José Gil Longo Secretario
  3. Jorge Diogène Vogal
  4. Panagiota Katikou Vogal
  5. Paulo Vale Vogal
Departamento:
  1. Departamento de Farmacoloxía, Farmacia e Tecnoloxía Farmacéutica

Tipo: Tese

Resumo

Las ficotoxinas marinas son productos naturales de origen algal, que pueden llegar al hombre u otros depredadores por vía alimentaria a través de moluscos, crustáceos, gasterópodos o peces, en forma de aerosol o por contacto directo con el agua de mar. Aunque sólo un 1% de las microalgas que forman el fitopláncton tienen la capacidad de producirlas, sus efectos a nivel sanitario y económico son altamente dañinos, provocando al año miles de intoxicaciones en humanos y millones de pérdidas en la industria acuícola en todo el mundo. En este contexto, la detección, monitorización y regulación de dichas toxinas, resulta esencial para salvaguardar la salud humana sin perjudicar los intereses industriales. En la Unión Europea, el método oficial de detección para la mayoría de estas toxinas es el bioensayo en ratón, pero este método presenta numerosos inconvenientes técnicos, éticos y legales, derivados del uso de animales en el laboratorio. En la presente tesis doctoral, se han desarrollado métodos de detección en extractos de molusco para tres grupos de ficotoxinas distintos: iminas cíclicas, saxitoxina y yessotoxina, empleando dos técnicas relativamente recientes: la polarización de fluorescencia y los biosensores basados en el fenómeno óptico de la resonancia del plasmón superficial (SPR, del inglés surface plasmon resonance). Ambas técnicas permiten la detección y monitorización de uniones moleculares en tiempo real, proporcionando respecto al bioensayo dos ventajas importantes: no usan animales y son altamente específicas. Los resultados obtenidos permiten concluir: 1) El ensayo desarrollado para las toxinas del grupo de la saxitoxina basado en el uso de un biosensor SPR, un anticuerpo anti-gonyautoxina2/3 (un análogo de la saxitoxina) y un chip de saxitoxina, puede ser utilizado como método de criba en muestras naturales si se emplea una extracción con etanol al 90 % ya que permite la detección de estas toxinas a una concentración 5 veces menor que el límite máximo permitido por la Unión Europea. 2) Los biosensores SPR permiten la detección de yessotoxina en el mismo rango que los biosensores de espejos resonantes (dentro de los límites establecidos por la Unión Europea), pero con un tiempo de análisis de muestra 10 veces menor y 3) La inhibición de la unión entre la ¿-bungarotoxina marcada fluorescentemente y los receptores nicotínicos de acetilcolina, por parte de gymnodimina y espirólidos (toxinas pertenecientes al grupo de las iminas cíclicas); puede utilizarse para detectar y cuantificar la presencia de estas toxinas en moluscos mediante polarización de fluorescencia si se utiliza una extracción de la muestra con acetona/hexano/cloroformo.