Estudio funcional del gen pelota

Resumo

ESTUDIO FUNCIONAL DEL GEN PELOTA Marta Cuervo López, 2009. El objetivo principal de esta tesis ha sido estudiar las funciones del gen pelota. Este gen fue identificado en la espermatogénesis de Drosophila como necesario para la división meiótica, en concreto en la transición entre las fases G2 y M del ciclo. Estudios en ratones knockout demostraron que tras su eliminación tenía lugar un parón del desarrollo embrionario del animal en el quinto día, un fenotipo compatible con la parada en la fase G2 del ciclo celular, lo que sugería que en mamíferos la función de pelota podría extenderse a la transición G2/M mitótica. Por otra parte, tanto pelota como sus homólogos (entre los que figuran Dom34 en levaduras) presentan dominios homólogos a eRF1, lo cual sugiere un posible papel a nivel de la maquinaria de traducción, algo que parece verse confirmado mediante resultados que señalan a Dom34 como una proteína que interacciona con Hbs1 y que presenta un motivo de unión a RNA presente en proteínas ribosomales y factores que regulan la traducción de mRNAs específicos. En el caso de S. cerevisiae, Dom34 está implicada junto con Hbs1 en un mecanismo de degradación de mRNAs aberrantes descrito recientemente y denominado NoGo Decay, en el que parece tener una función endonucleasa encargada de la rotura inicial del mRNA. Estos datos nos plantean la posibilidad de que pelota, al igual que su homólogo Dom34 esté implicado en procesos de control de calidad del RNA mensajero, entre los que se encuentran NoGo Decay, NonStop Decay o bien NMD (NonSense Mediated Decay). En primer lugar hemos estudiado las posibles implicaciones del gen pelota en la transición a través de las distintas fases del ciclo celular. Para ello hemos empleado shRNAs (short hairpin RNA), RNAs de doble cadena capaces de inducir una respuesta de silenciamiento génico específica de secuencia. Por otra parte, hemos empleado una serie de vectores reporter que codifican mRNAs defectuosos y susceptibles de ser degradados por los mecanismos de control de calidad del mRNA antes mencionados. Estos vectores reporter, junto con el uso de los shRNAs específicos contra pelota nos han permitido estudiar las posibles implicaciones de pelota en estos mecanismos.