Caracterización y comparación de las señales de transducción implicadas en la activación de las células HMC-1 560 y HMC-1 560,816

  1. Kristin Löber
Dirixida por:
  1. Luis Miguel Botana López Director
  2. María Amparo Alfonso Rancaño Director

Universidade de defensa: Universidade de Santiago de Compostela

Ano de defensa: 2009

Tribunal:
  1. Alberto Orfao Presidente/a
  2. M. Reyes Laguna Francia Secretaria
  3. Ana M. García Cabado Vogal
  4. Octavio Pernas Sueiras Vogal
  5. Luis Escribano Mora Vogal
Departamento:
  1. Departamento de Farmacoloxía, Farmacia e Tecnoloxía Farmacéutica

Tipo: Tese

Resumo

De la línea celular de mastocitos humanos HMC-1 existen dos sublíneas que se diferencian en mutaciones en el receptor c-kit. Se estudia la modulación de las cinasas de tirosina (TyrK) sobre la viabilidad celular (con el test MTT), la liberación de histamina (con el metódo de Shore), el Ca2+ citosólico (con FURA-2) y el pH intracelular (con BCECF). Se utilizan los inhibidores de TyrK STI571, lavendustina A y genisteina en las dos sublíneas HMC-1 y se observa que el fármaco STI571 reduce la liberación espontánea de histamina en células HMC-1560 y HMC-1560,816 a través de TyrK diferentes de las que se activan por el receptor c-kit. Además STI571 aumenta la liberación de histamina inducida por una alcalinización en células HMC-1560 y HMC-1560,816. Dado que el pH intracelular tiene una gran importancia en las células HMC-1, se incuban las células en medios sin HCO3- o sin Na+/HCO3-. De esta forma se definen los intercambiadores implicados en la regulación del pHi basal. Además se determina como estos transportadores afectan a la viabilidad celular y a la liberación de histamina inducida por una alcalinización. De esta forma se concluye que las células HMC-1560 y HMC-1560,816 expresan el intercambiador NHE1 y un transportador de HCO3- dependiente de Na+ que es más sensible en las células con dos mutaciones. Además el transportador de HCO3- y la presencia de este ión en el medio extracelular son imprescindibles para la supervivencia de las células HMC-1560 y HMC-1560,816 y participan en la alcalinización citosólica en las dos sublíneas. Se ha observado que la PKC modula la desgranulación de mastocitos. En este contexto se estudian los efectos de la estimulación de PKC sobre la liberación de histamina, los niveles de Ca2+ citosólico y la expresión de c-kit (citómetro de flujo). Se observa que en las células HMC-1560 y HMC-1560,816, la PKC delta es un regulador negativo de la liberación de histamina inducida por un ionóforo de Ca2+. Además la activación de la PKC o un aumento en el Ca2+ citosólico reduce por distintos mecanismos la expresión del receptor c-kit en las células HMC-1560 y HMC-1560,816. Estas rutas son distintas de las que inducen liberación de histamina.