Regulacion del factor de transcripcion especifico de hipófisis Pit-1) por péptidos secretagogos de la hormona de crecimiento
- Carlos Diéguez González Director
- M. Clara Alvarez Villamarin Co-director
- Ricardo Riguera Vega Director
Universidade de defensa: Universidade de Santiago de Compostela
Fecha de defensa: 29 de setembro de 2000
- Manuel Freire Rama Presidente
- Emilio Quiñoá Cabana Secretario
- Fernando Domínguez Puente Vogal
- José Castro Pérez Vogal
Tipo: Tese
Resumo
Los secretagogos de la hormona de crecimiento GHS son un conjunto de moléculas sintéticas de naturaleza peptídica y no peptídica. La clonación del recptor para estos liberadores no clásicos de GH (hormona de crecimiento) conjuntamente con la más reciente caracterizaciónde su ligando endógeno, llamado Ghrelin, ha supuesto de forma enequívoca la demostración de la existencia de un nuevo sistema fisiológico que regula la secreción de GH. La expresión del gen de GH depende de un factor de transcripciónespcífico de la hipófisis, llamado Pit-1, El objetivo de este trabajo es determinar si el hexapéptido sintético GHRP-6, un referente en el mundo de los GHS, así como el ligando endógeno Ghrelin regulan la expresiónd el gen d ePit-1,Dado que el efecto de estos compuestos sobre la secreción de GH parece ser más prominente en ratas neonatas, se ensayaron los efectos de GHRP-6 sobre la expresión del gen Pit-1 en cultivos monocapa de células adenohipofisarias (AH) de ratas macho de 15 días, así como los efectos sobre el promotor de gende Pit-1 mediante el uso de una línea celuar HEK-293-GHS-R que sobreexpresa el receptor de los GHS (GHS-R). Finalmente se compararon los efectos de Ghrelin y GHRP-6 sobre el promotor de Pit-1. Mediante una combiación de northern blot (estudio del mRNA) y western blot (estudio a nivel de protínas) se comprobó que GHRP-6 activa de forma tiempo y dosis-dependiente la expresión del gen de Pit-1 en cultivos de células AH de ratas macho de 15 días. Así mismo se comprobño que este efecto es directo bore el gen de Pit-1, mientras que el efecto (tabmién observado) de GHRP-6 sobre la expresión de los genes de GH y prolactina pudiera ser mediado por el propio Pit-1 Así mismo, mediante RIA (radioinmunoensayo) se vio que GHRP-6 a una dosisi 10-6 M causaba un aumento en la GH secretada por las células al medio de cultivo tras 4h de tratamiento. Mediante experimentos de trasnfección en la